小鼠模型B-hTNFA/hIL17A与银屑病的治疗新途径

　　咣咣咣...各位看官晚上好呀，真是好久没有灌输营养知识啦，小编甚是想念这个步调，想必大家也是很希望自己的2020年硕果累累，猜猜看今天小编带来什么样的惊喜呢，那就是B-hTNFA/hIL17A 小鼠。

　　建立B-hTNFA/hIL17A小鼠模型，有助于推进以TNF-α和 IL-17A为治疗靶点的抗体新药开发，这将可能成为治疗银屑病的新途径呢，那就一起去看看吧~

　　基本信息

　　基因功能简介

　　TNF基因编码一种多功能促炎细胞因子——TNFα，属于肿瘤坏死因子 (TNF) 超家族，可由CD4+淋巴细胞、NK细胞、嗜中性粒细胞等多种类型细胞产生，但主要由活化的巨噬细胞产生。肿瘤坏死因子 (TNF) 超家族是含有 TNF 同源结构域并形成三聚体的 Ⅱ 型跨膜蛋白的蛋白超家族。该超家族成员可通过细胞外蛋白水解裂解从细胞膜上释放出来，并作为细胞因子发挥作用。这些蛋白主要由免疫细胞表达，它们调节多种细胞功能，包括免疫应答和炎症，但也包括增殖、分化、凋亡和胚胎形成。TNF产生的失调与多种人类疾病有关，包括阿尔茨海默氏病、癌症、重度抑郁症、银屑病和炎症性肠病。

　　IL17A基因编码的蛋白是由活化的T细胞产生的促炎性细胞因子，是IL-17家族的创始成员。IL17A可以调节 NF-κB 和丝裂原活化蛋白激酶的活性，刺激 IL6 和环氧合酶-2 (PTGS2/COX-2) 的表达，以及增强一氧化氮 (NO) 的产生。高水平的IL17A与几种慢性炎症性疾病有关，包括类风湿性关节炎、哮喘、银屑病和多发性硬化症。

　　研究发现，IL-17和TNF-α在银屑病皮损中表达呈正相关，表达位置也基本一致，提示二者在其发病中具有协同促进作用， IL-17可能促进角质形成细胞分泌TNF-α，促进局部血管形成，加速表皮增殖，加重局部炎症反应，导致病程迁延慢性化[1]。

　　TNF信号通路

　　IL-17A信号通路

　　B-hTNFA/hIL17A小鼠蛋白表达分析

　　通过ELISA方法对B-hTNFA/hIL17A纯合小鼠中TNFα蛋白表达进行分析

　　收集体内 LPS 刺激的野生型C57BL/6和 B-hTNFA/hIL17A (H/H) 纯合小鼠血清，用种属特异性 TNFα ELISA 试剂盒进行 ELISA 分析。

　　结果表明：在野生型C57BL/6小鼠中可检测到小鼠TNFα；人TNFα 仅在B-hTNFA/hIL17A纯合小鼠中可检测到，但在 WT 小鼠中未检测到。

　　B-hTNFA/hIL17A小鼠蛋白表达分析

　　通过ELISA方法对B-hTNFA/hIL17A纯合小鼠中IL17A蛋白表达进行分析

　　收集体内 LPS 刺激的野生型C57BL/6和 B-hTNFA/hIL17A (H/H) 纯合小鼠血清，用种属特异性 IL17A ELISA 试剂盒进行 ELISA 分析。

　　结果表明：在野生型C57BL/6小鼠中可检测到小鼠IL17A；人IL-17A仅在B-hTNFA/hIL17A纯合小鼠中可检测到，但在 WT 小鼠中未检测到。

　　表型分析

　　B-hTNFA/hIL17A 小鼠的白细胞亚群分析

　　通过流式细胞术测试白细胞亚群的比例

　　从C57BL/6和B-hTNFA/hIL17A小鼠（n=3）中分离出脾细胞，通过流式细胞术测试白细胞亚群的比例。

　　结果表明：纯合B-hTNFA/hIL17A小鼠中白细胞亚群的表达谱与C57BL/6小鼠相似，hTNFA和hIL17A的人源化不影响T、B、NK、粒细胞、单核细胞、DC和巨噬细胞的分化。

　　B-hTNFA/hIL17A 小鼠的白细胞亚群分析

　　通过流式细胞术测试T细胞亚群的比例

　　从C57BL/6和B-hTNFA/hIL17A小鼠（n=3）中分离出脾细胞，通过流式细胞术测试T细胞亚群的比例。

　　结果表明：纯合B-hTNFA/hIL17A小鼠中白细胞亚群的表达谱与C57BL/6小鼠相似，hTNFA和hIL17A的人源化不影响CD45细胞中mCD4、mCD8以及T细胞中mCD4、mCD8的分化。

　　B-hTNFA/hIL17A 小鼠的白细胞亚群分析

　　通过流式细胞术测试白细胞亚群的比例

　　从C57BL/6和B-hTNFA/hIL17A小鼠（n=3）中分离出淋巴结细胞，通过流式细胞术测试白细胞亚群的比例。

　　结果表明：纯合B-hTNFA/hIL17A小鼠中白细胞亚群的表达谱与C57BL/6小鼠相似，hTNFA和hIL17A的人源化不影响T、B和NK细胞的分化。

　　B-hTNFA/hIL17A 小鼠的白细胞亚群分析

　　通过流式细胞术测试T细胞亚群的比例

　　从C57BL/6和B-hTNFA/hIL17A小鼠（n=3）中分离出淋巴结细胞，通过流式细胞术测试T细胞亚群的比例。

　　结果表明：纯合B-hTNFA/hIL17A小鼠中白细胞亚群的表达谱与C57BL/6小鼠相似，hTNFA和hIL17A的人源化不影响CD45细胞中mCD4、mCD8以及T细胞中mCD4、mCD8的分化。

　　参考资料

　　[1] 王娟, 鲍海平. 寻常型银屑病皮损中IL-17和TNF-α的表达[J]. 山西大同大学学报(自然科学版), 2018, 34(06):53-55.

　　[2] MacEwan DJ. TNF ligands and receptors

　　–

　　a matter of life and death. Br J Pharmacol. 2002 Feb；135(4):855-75. DOI: 10.1038/sj.bjp.0704549.

　　[3] Sarah L. Gaffen, IL-17 family cytokines mediated signaling in the pathogenesis of inflammatory diseases.Cell Signal.2013Dec；25(12):2335-47. doi: 10.1016/j.cellsig.2013.07.021.