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高效液相色谱常见故障处理

2022.2.13

  故障1:在移动相存在气泡,关闭泵,打开排气阀,按下清洗键和通风口,气泡继续从过滤器中冒出来,进入移动相,无论打开多少次清洗键,都不能清除连续产生的气泡。

  理由:

  过滤器在水中浸泡很长时间,由于霉菌在过滤头中的生长和传播,过滤器被细菌的形成所堵塞。"缓冲器很难顺利通过过滤头,空气在泵的压力下通过过滤器进入移动相。过滤头用5%硝酸溶液浸泡,超声清洗15 min。滤头还可以在5%硝酸溶液中浸泡12小时,轻轻震荡36小时,然后用纯净水冲洗几次,打开排气阀,打开净化键,从滤池中取出气体,如果过滤器中还有气泡,则继续将过滤器浸泡在5%硝酸溶液中。如果过滤器内没有气泡继续出现,就意味着过滤器内的霉菌可以被硝酸破坏,流动相可以顺利通过过滤器,打开排气阀,打开泵流量调节1。0×30 mL/min,冲洗1小时左右,即可清洗滤液。关闭减压阀,用纯甲醇冲洗半小时。

  故障2:柱压高;

  原因:

  (1)缓冲液盐份如,乙酸铵等,沉积柱内;

  (2)样品污染沉积:

  处理对于第一种情况先用40~50度的纯水,低速正向冲洗柱子待柱压逐渐下降后,相应的提高流速冲洗柱压大幅度下降后,用常温纯水冲洗,之后用纯甲醇冲洗柱子30分钟,对于第2种情况,由样品的沉积引起污染的C18柱,和纯水反向冲洗柱子,然后换成甲醇冲洗,接着用甲醇+异丙醇[4+6]冲洗柱子[冲洗时间的长短由样品的污染情况而定],在用换成甲醇冲洗,然后用纯水冲洗,最后甲醇冲洗,正向冲洗柱子30分钟以上。

  故障3:既无压力指示又无液体流过

  原因:

  1.泵密封垫圈磨损;

  2.大量气体进入泵体:

  处理对于第一种情况,更换密封垫圈,对于第二种情况,在泵作用的同时,用一个50mL的玻璃针筒在泵的出口处不帮助抽出空气。

  故障4:压力波动很大,流量不稳定。

  理由:

  宝石球与空气座或单向阀之间有异物,使两者不能密封;

  处理:注意工作中流动相的量,确保不锈钢过滤器沉入贮液瓶底部,避免吸入空气,移动相应完全放气,例如单向阀与阀座之间有异物,拆下单向阀,放入装有丙酮的烧杯中,用超声波清洗。

  故障5:峰不准确,峰叉。

  理由:

  (1)色谱柱受到污染;

  (2)封头包装倒塌:

  对于第一种情况,先用纯水向后冲洗柱,然后用甲醇+异丙醇(4+6)冲洗(冲洗时间的长短由样品污染的情况而定),然后用甲醇冲洗,然后用纯净水冲洗,最后用前冲30分钟以上。如果冲洗后的峰值仍不佳,则考虑第二种情况。在第二种情况下,松开封头,检查柱填料是否硬化或坍塌,拆卸硬化部分(污染的填料),装入新填料,滴下一滴甲醇,填料沉入,再填充,用与辅助内径相同的光滑不锈钢棒压下,填充、滴下甲醇,并反复按压几次直到填充。用甲醇冲洗头部,擦拭柱外壁的填料,拧紧头,用纯甲醇冲洗30分钟以上。

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