重组CHO细胞分离及蛋白收获技术介绍

简介：

现今，通过哺乳动物细胞培养，新一代生物制药得到了前所未有的发展。本文主要介绍通过中空纤维微孔过滤，以分离哺乳动物分泌蛋白的过程。起始浓度为2×10⁵ cell/ml，细胞外蛋白产物是一种与白介素-2相似的10kD淋巴因子，是一种潜在的肿瘤治疗药物。该应用需要去除细胞和颗粒，而不裂解细胞，同时达到较高的蛋白回收率。由于产品为热不稳定，所以处理时间非常关键。

KrosFlo中空纤维过滤组件

工艺条件：

鉴于细胞浓度较低，600L的处理量通常只需要膜表面积为2-3m² 的过滤器。但该处理要求的时间较短，所以平行安装了2个0.2 µm 截留分子量的KrosFlo组件，每个膜表面积为3.3 m² 。预计循环速度为70 L/min。过滤器进口压力固定为5 psig。当过滤量达到处理量30%时，在过滤器出口施加10psig背压，即将过滤器进口压力上升为15psig左右。除了小的调整之外，所有条件在处理过程中保持不变。

结果：

600L 样品处理于65min完成过滤。稳态流速为85 L/m2hr。过滤量与时间基本呈线性关系。为最大限度提高过滤量，处理过程中对压力和流量稍做优化。正如预期，过滤器的流率随时间稍有衰减，但处理器的产物回收率仍可达到94%甚至更高。

通量 & 过滤量 vs. 时间

讨论：

该处理中，目的蛋白会与聚砜膜紧密结合，但从经济上考虑，又需要有较高的产率。KrosFlo纤维膜具有良好的蛋白通道，作为一次性使用组件，可从工艺运行开始到结束保持始终如一的膜特性，同时消除了膜清洗所需的成本和时间，并避免污染风险。瑞普利金（原仕必纯）膜组件具有多种不同的表面积规格，方便工艺处理时间的优化。数据显示，使用微孔中空纤维错流过滤，可同时实现热敏感产物的快速过滤和高回收量。