流式细胞仪的参数测量原理
流式细胞仪可同时进行多参数测量，信息主要来自特异性荧光信号及非荧光散射信号。测量是在测量区进行的，所谓测量区就是照射激光束和喷出喷孔的液流束垂直相交点。液流中央的单个细胞通过测量区时，受到 激光照射会向 立体角为2π的整个空间 散射光线，散射光的 波长和入射光的波长相同。 散射光的强度及其空间分布与细胞的大小、形态、质膜和细胞内部结构密切相关，因为这些生物学参数又和细胞对 光线的反射、折射等光学特性有关。未遭受任何损坏的细胞对 光线都具有特征性的散射，因此可利用不同的 散射光信号对不经染色 活细胞进行分析和分选。经过固定的和染色处理的细胞由于光学性质的改变，其 散射光信号当然不同于活细胞。 散射光不仅与作为散射中心的细胞的参数相关，还跟散射角、及收集散射光线的 立体角等 非生物因素有关。
在 流式细胞术测量中，常用的是两种散射方向的 散射光测量：①前向角（即0角）散射（FSC）；②侧向散射（SSC），又称90角散射。这时所说的角度指的是激光束照射方向与收集 散射光信号的光电倍增管轴向方向之间大致所成的角度。一般说来，前向角 散射光的强度与细胞的大小有关，对同种细胞群体随着细胞截面积的增大而增大；对球形活细胞经实验表明在小 立体角范围内基本上和截面积大小成 线性关系；对于形状复杂具有取向性的细胞则可能差异很大，尤其需要注意。侧向 散射光的测量主要用来获取有关细胞内部精细结构的颗粒性质的有关信息。侧向 散射光虽然也与细胞的形状和大小有关，但它对 细胞膜、胞质、 核膜的折射率更为敏感，也能对 细胞质内较大颗粒给出灵敏反映。
在实际使用中，仪器首先要对光散射信号进行测量。当光散射分析与荧光探针联合使用时，可鉴别出样品中被染色和未被染色细胞。光散射测量最有效的用途是从非均一的群体中鉴别出某些亚群。
荧光信号主要包括两部分：①自发荧光，即不经荧光染色细胞内部的 荧光分子经光照射后所发出的荧光；②特征荧光，即由细胞经染色结合上的 荧光染料受光照而发出的荧光，其荧光强度较弱， 波长也与照射激光不同。自发荧光信号为噪声信号，在多数情况下会干扰对特异荧光信号的分辨和测量。在 免疫细胞化学等测量中，对于结合水平不高的荧光抗体来说，如何提高信噪比是个关键。一般说来，细胞成分中能够产生的自发荧光的分子（例核黄素、 细胞色素等）的含量越高，自发荧光越强；培养细胞中死细胞/活细胞比例越高，自发荧光越强；细胞样品中所含亮细胞的比例越高，自发荧光越强。
减少自发荧光干扰、提高信噪比的主要措施是：①尽量选用较亮的 荧光染料；②选用适宜的激光和滤片 光学系统；③采用电子补偿电路，将自发荧光的本底贡献予以补偿。
