[求助]这个HUVEC为什么状态不佳？

字体: 小中大 | 打印发表于: 2012-2-09 11:46 作者: zzzz 来源: 分析测试百科网

本人近来在培养人脐静脉内皮细胞（HUVEC）,购买的是Cascade的2代HUVEC，干冰48H运输过来实验室，立即37度复苏，每支细胞含活细胞3*10的5次方，用BD的T25培养瓶培养，共接种一瓶，采用的是不离心的方法，复苏后24H全量换液，以后隔天全量换液；培养基已经添加了生长因子（细胞供应方专配），到现在已经有6天了，细胞数目尚可，但是细胞状态不是太好，细胞颗粒感很明显。其中在第三天的时候因为细胞不佳，提高了培养基的胎牛血清的浓度为20%（原培养液血清浓度为1.9%)，至今也3天了。有照片，请大家帮忙看看，到底是什么原因，谢谢！

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zzzz (2012-2-09 11:47:08)

图片继续！

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2541 (2012-2-09 11:47:37)

本人也在养HUVEC，也是从ATCC定来的，不过建议一开始culture的medium就应该含20％ FBS。当然之前用过EGM培养液，它里面的FBS就不到20％，不过它含有其它一些添加物，养的也很不错，就是贵。培养HUVEC，大多数用M199（20％ FBS），F-12k （20％FBS），还有就是EGM系列。感觉你的照片中有很多发亮发白的，不知是什么，是没有贴壁的细胞嘛？愿意听更多人的意见。
2541 (2012-2-09 11:49:23)

补充一句，我看许多paper上都些在培养皿（哪怕是treated）上先要铺一层gelatin，自己一直也这么做，据说可以帮助HUVEC贴壁，但是没有对比过铺与不铺究竟有多大区别或影响。
zhezhe (2012-2-09 11:49:44)

最好检查一下培养箱温度与二氧化碳的浓度。我也养过HUVEC,用的是10cm dish，血清浓度为15%，自己配的DMEM ，培养基中添加了NEAA，细胞长的很好，也很快。你可以把细胞分出一些在其他的培养箱内培养看看。
owanaka (2012-2-09 11:50:03)

细胞中间出现很多的空泡，周围有很多的黑点，说明该细胞已经出现凋亡的现象
HUVEC是原代细胞，比较娇贵
其增殖和生长需要某些生长因子的刺激（细胞本身也会分泌这些因子，所以提高传代时的细胞数量可以稍微改善细胞的状态）。
像cambrex的EGM-2培养基，血清的含量只有2％，但是养出来的细胞非常漂亮，所以单纯靠提高血清含量作用不是很大，而且容易诱发细胞分化，不值得提倡。
据说一位从国外回来的同事说，MCDB培养基＋ECGS＋VEGF＋10%血清也能把HUVEC养的很好，但具体我没实践过,不好说。
zzzz (2012-2-09 11:50:26)

谢谢大家的建议！
我的培养基是提供细胞的公司专配的，同时细胞培养箱还有其他人的细胞都长的很好，没有理由怀疑。要是说细胞本身不好，但是为什么复苏后的贴壁又这么好呢，就是细胞看起来不清爽，颗粒感明显，还是很困惑。我打算复苏下一支的时候，换用更好的BD一次性培养瓶，T-12.5。增加细胞复苏时的密度看看情况怎么样，有什么进展再来和大家汇报。
cj_mondy (2012-2-09 11:50:44)

楼主在哪家公司订到的这个二代的细胞，我以前买过，现在代理公司说没有二代只有原代的了，价格差的挺多的。我当时买了这个细胞以后就直接用得cascade自己配套的M200和LSGS，细胞状态一直还不错的，但是感觉传代到后面LSGS里2%的血清浓度太低细胞状态不好，加大血清浓度会好很多。我现在都直接用这个培养基养自己分的HUVEC
66+77 (2012-2-09 11:51:03)

请问HUVEC自己分好还是购买好，能传几代，买一次够试验用吗？
yueban-1147 (2012-2-09 11:51:25)

我用的是HUVECS，1640+10%血清，细胞生长状态很好
8964357 (2012-2-09 11:53:19)

请问你里面加生长因子和肝素了吗？我用的高糖DMEM+15%血清，但状态不好。