本程序假设用单层细胞进行染色,而固定的悬浮细胞也可以使用,但从第6 步开始。
1. 移除培养基。
2. 用 D-PBSA 冲洗单层细胞,去掉冲洗液。
3. 加 D-PBSA / 甲醇液 5 ml/25 cm2,静置 2 min,然后去掉 D-PBSA / 甲醇。
4. 加新甲醇 5 ml,静置 10 min。
5. 弃掉甲醇液,用无水甲醇,冲洗单层细胞,去掉甲醇。
6. 此时,培养瓶经干燥可贮存,也可直接进行染色。用新无水甲醇冲洗后直接染色是非常重要的,即使是干的培养瓶。如果甲醇倒出,培养瓶静置了一段时间后,残留的甲醇会吸收水分,从而妨碍下一步的染色,即使是干燥的单层细胞也可从空气中吸收水分。
7. 加入纯的 Giemsa 染液,2 ml/ 25 cm2,确保保持覆盖整层细胞。
8. 2 min 后,用 8 ml 水稀释染液,并轻轻晃动 2 min 。
9. 用水置换染液,使形成的浮渣流走,而不会留下来覆盖在细胞上,用自来水冲洗细胞,直到去除片状粉色本底(沉积),但不能漂掉细胞的染色(通常 10~20s)。
10. 将水倒出,用去离子水冲洗,在单层细胞仍处于湿润状态时,用显微镜观察细胞,干燥保存细胞,再观察时重新湿润。 展开 |