布鲁菌病的实验室检验方法及操作步骤

2019.9.12

1．布氏杆菌病的平板凝集试验

试验目的：利用本试验对大量样本进行初步筛选。筛选出的阳性反应血清，再做试管凝集试验，以试管凝集的结果为被检血清的最终结果。

方法步骤：

(1)取一长方形洁净玻璃板，用玻璃铅笔划成若干方格，每格约4cm2，编号。

(2)分别吸取25μL被检血清、生理盐水、标准阳性血清、标准阴性血清加于不同编号的方格内，每吸一种成分需换一个吸头。

(3)吸取25μL抗原加到玻璃板的每一个格内，用牙签将抗原与血清充分混匀，每混匀一格需更换一根牙签。

于室温（15℃以上）静置4min观察结果，如室温过低，可适当加温。

(4)在对照标准阳性血清(+)、标准阴性血清（一）、生理盐水（一）反应正常的前提下，被检血清出现大的凝集片或小的颗粒状物、液体透明判为阳性(+)，液体均匀混浊，无任何凝集物判为阴性（一）。

2．布氏杆菌病的试管凝集试验

实验目的：试管凝集试验是一种定量试验，可排除玻片法凝集试验的非特异凝集，是鉴定细菌更为准确可靠的凝集试验，用以检测待检血清中是否存在相应抗体和测定该抗体的含量，以协助临床诊断或供流行病学调查。

方法步骤见下表。

试管凝集试验术式表 mL

注：检查羊时．用5%石炭酸的10%盐水稀释血清和抗原；检查牛时，用5%石炭酸生理盐水稀释抗原和血清。

各试管加完抗原后，充分振荡，置于37℃温箱中4～10h，取出后置于室温18～24h，然后观察并记录结果。待检血清稀释度：猪、羊、犬为1：25，1：50，1：100，1：200，牛、马和骆驼为1: 50，1：100，1：200，1：400等四个稀释度。大规模检疫可只用两个稀释度，即猪、羊、犬为1: 25和1：50，牛、马和骆驼为1：50和1：100。

结果判定：判定结果时用“+”表示反应的强度。

++++，液体完全透明，菌体完全被凝集呈伞状沉于管底，振荡时，沉淀物呈片状、块状或颗粒状，表示菌体100%被凝集。

+++，液体稍有混浊，菌体大部分被凝集沉于管底，振荡时情况同上，表示菌体75%被凝集。

++，液体不甚透明，呈淡乳白色混浊，管底有明显的凝集沉淀，振荡时有块状或小片絮状物，表示菌体50%被凝集。

+，液体透明度不明显或不透明，管底有不甚显著的沉淀或仅有沉淀的痕迹，表示菌体25%被凝集。

一：液体完全混浊，不透明，有时管底中央有一部分圆点状沉淀物，但振荡后立即散开呈均匀混浊，表示菌体完全不凝集。

确定血清凝集价（滴度）时，应以出现“++”以上凝集现象的最高稀释度为准。

判定标准：牛、马和骆驼凝集价为1：100以上，猪、羊和犬的凝集价为1：50判为阳性。牛、马和骆驼凝集价为1：50，猪、羊和犬凝集价为1: 25判为可疑。

可疑反应的家畜，经3～4周后再采血重新检查。牛和羊仍为可疑判为阳性，猪和马仍为可疑，而畜群中又没有病例和大批阳性病畜，则判为阴性。

3．虎红平板凝集试验

在清洁的玻片上加0. 03mL的被检血清，然后再加入虎红平板凝集抗原0.03mL，充分混合均匀，4min内观察结果。

以出现可见的凝集现象判定阳性，无凝集现象为阴性，无可疑反应。