一、  神经干细胞的定向诱导分解

将一部分次代神经球机械别离制成单细胞悬液后别离参与条件培育液和有血清培育基(含10％胎牛血清的DMEM/F12)中对照贴壁培育，7d后均行ChAT免疫细胞化学染色。

二、BrdU符号

将BrdU溶于无血清培育基，过滤除菌后参与神经球构成后再次机械别离克隆制作的单细胞悬液中(BrdU终浓度为5μmol/L)，培育7d待新的神经球构成后，将神经球转移到预先涂布有多聚赖氨酸的培育板中，贴壁2h行BrdU免疫细胞化学染色。

三、  神经干细胞的诱导分解

选取部分上述传代后构成的次代神经球培育于预先涂布有多聚赖氨酸的24孔培育板中，并参与有血清培育基(含10％胎牛血清的DMEM/F12)，一部分神经球于贴壁2h后行Nestin免疫细胞化学染色，另一部分神经球继续培育，调查其生长分解情况。另将一部分次代神经球机械别离制成单细胞悬液后参与有血清培育基贴壁培育，7d后别离行Tuj1 、GFAP 、Galc 免疫细胞化学染色。

四、  条件培育液的制备

取1g鸡胚的后肢骨骼肌安排，参与9mlD-Hanks液中冰浴匀浆15min，离心取得上清液，过滤除菌后，加两倍体积DMEM/F12培育基制成条件培育液备用。

五、  神经干细胞的别离和传代

无菌条件下取重生SD大鼠(出生48h内)脑安排，D-Hanks液充沛漂洗后，在解剖显微镜下剥离脑膜，精确别离海马，用眼科剪将海马剪碎后，再转移到DMEM/F12(1:1)加B27 和bFGF(20ng/ml)的无血清培育基，吸管吹打机械别离制作单细胞悬液，台盼蓝染色后细胞计数，调整细胞浓度为5×104~5个/ml，置于24孔培育板中培育，每孔参与细胞悬液500μl。