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酶免疫检测析前需要准备那些试剂

2021.11.15

①1倍冲洗液的制备  稀释20mL 25倍冲洗浓缩液于480mLH2O中。

②对照抗原  加2mL 无菌 H2O 于阴性对照瓶中,加1mL 无菌 H2O 于阳性对照瓶中混匀。加水复原的抗原在2~8℃贮存可稳定60天。

从箔袋中取出所需数量的小孔(每个食品样品1个孔和3个对照孔)。将小孔固定在条板托中。移取0.1mL经加热处理过的 MN 肉汤样品放入单独的孔中。移取0.1mL 阴性对照液,放入2个小孔中;移取0.1mL 阳性对照液,放入1个小孔中。
用条板密封纸将板封上,于37℃培养30min。

培养后,从每个孔中吸出内容物并加0.2~0.3mL 1倍冲洗液于每一小孔中,重复此步骤2次。吸出最后的冲洗液。如果用自动冲洗器而平板没有填满,用没有包被的小孔填充空位。
吸移0.1mL 酶接合剂于每一孔中,封板,于37℃培养30min。

吸出并用0.2~0.3mL 1倍冲洗液冲洗每孔6次,吸出最后的冲洗液前,在玻璃试管中等量混合 TMB 溶液 A 和 TMB 溶液 B。吸移0.1mL TMB 酶底物于每一小孔中,于室温(20~25℃)培养30min 加0.1mL 终止液于每一小孔中。按(7)在10~15min 内读条板。(7)读数在读数器上选用450nm 波长。以空气做零点(无条板托盘和条板)读取每一孔中溶液的吸收值 A,计算阴性对照孔 A 的平均值(应为<0.30),阳性对照的 A 必须为0.70。对照的 A 必须在此范围内,检测则有效。用阴性对照 A 的平均值加0.25计算临界值。若样品 A 大于或等于临界值则推定为阳性,若样品 A 小于临界值则推定为阴性。(8)EIA 阳性样品的确认  EIA 读数阳性则表明可能存有沙门氏菌。由于抗体可与少数其他细菌交叉反应,故应按传统检验方法从四硫磺酸盐肉汤,亚硒酸盐胱氨酸肉汤和混合的MN 肉汤管中蘸取培养物在 Hektoen 肠道(HE),木糖赖氨酸去氧胆酸(XLD)和亚硫酸铋(BS)琼脂平板上划线分离进行养物的确证。典型或可疑菌落必须按传统培养方法进行生化和血清学鉴定。


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