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植物体内硝态氮含量的测定实验

2019.11.15

实验方法原理:在强酸条件下NO3与水杨酸反应,生成硝基水杨酸。生成的硝基水杨酸在碱性条件下(pH>12)呈黄色,在一定范围内,其颜色的深浅与含量成正比,可直接用分光光度计测定。

实验步骤:一、材料仪器设备及试剂

1. 材料:小麦或水稻等植物的叶片;

2. 仪器设备:分光光度计;电子分析天平;10ml、20ml刻度试管;移液管;25ml容量瓶;小漏斗(ф5cm);玻棒;洗耳球;电炉;铝锅;玻璃泡;13.7cm定量滤纸若干。

3. 试剂及配制

10μg·ml-1 NO3―-N标准母液配制:精确称取烘至恒重的KNO30.1444g,溶于蒸馏水中,定容至200ml(即为100μg·ml-1 NO3―-N溶液)。然后再吸取该溶液10ml,加蒸馏水稀释至100ml,即为10μg·ml-1 的NO3―-N标准液。

5%水杨酸-硫酸溶液配制:称取5g水杨酸先加少量浓硫酸(密度为1.84)溶解后,再加浓硫酸定容至100ml,摇匀,贮于棕色瓶中,置冰箱保存一周有效。

8%氢氧化钠溶液配制:称取20g氢氧化钠溶于250ml蒸馏水中。

二、实验步骤

1.  NO3―-N标准曲线的制作

(1) 取6支10ml刻度试管,编号,按下表配制每管含量为0~10μg的NO3―-N标准液。加入表中试剂后,摇匀。在室温下放置20min后,每管再加入8.6ml 8﹪NaOH溶液,摇匀,使使显色液总体积为10ml。然后以0号管为空白对照,在410nm波长处测定吸光度(A)值。


(2) 标准曲线绘制

以1~5号管的NO3―-N含量为横坐标,吸光度值为纵坐标,绘制标准曲线。

2. 样品中硝酸盐的测定

(1)样品液的制备

取一定量的植物叶片剪碎混匀,称取2~3g(三份),分别放入三支20ml刻度试管中,加入10ml蒸馏水,用玻璃泡封口,置于沸水浴中提取30min。到时间后取出,用自来水冷却,将提取液过滤到25ml容量瓶中,并用蒸馏水反复冲洗残渣,最后定容至刻度。

(2)样品液的测定

取三支10ml刻度试管,分别加入样品液0.1ml,蒸馏水0.9ml, 5%水杨酸-硫酸溶液0.4ml,混匀后置室温下20min,再慢慢加入8.6ml 8%NaOH溶液,摇匀,使显色总体积为10ml,待冷却至室温后,以标准曲线0号管作空白对照 ,在410m波长处测定吸光度(A)值。

三、结果计算

根据样品液所测得的吸光度(A)值,从标准曲线上查出NO3―-N的含量,按下式计算样品中NO3―-N含量。






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