关注公众号

关注公众号

手机扫码查看

手机查看

喜欢作者

打赏方式

微信支付微信支付
支付宝支付支付宝支付
×

分享色谱柱柱活化冲洗的技巧

2021.2.09

  色谱柱使用pH范围在1.5~10.0,通常建议使用范围pH为2.0~8.0比较合适,流动相超出pH范围将会导致硅胶基质流失和键合相断裂使柱效下降,使用寿命变短,所以要严格控制pH范围。
新的色谱柱活化:采用100%甲醇1ml/min冲洗60min,再换成流动相进行平衡;如果流动相中含有缓冲盐,在换成流动相前,请使用过渡流动相过渡后再换流动相平衡;
一、日常维护
1、建议检测前样品和流动相进行过滤;
2、建议每天做完样品后及时进行清洗;
3、常规检测
测试完后,直接把色谱柱反向连接采用90%有机相冲洗45min,最后保存在纯甲醇或纯乙腈中;
4、使用缓冲盐条件:
1)等度条件:使用缓冲盐之前和之后都用过渡流动相以1ml/min流速冲洗45min;
2)梯度条件:使用缓冲盐之前与初始流动相组成相同的过渡流动相以1ml/min流速冲洗45min;
注意:过渡流动相是指有机相和水相比例与分析流动相相同比例,只是不含有缓冲盐;
3)缓冲盐冲洗干净后,采用90%有机相反向冲洗60min,最后保存在纯有机溶剂中;
注意:如果使用缓冲液不能存留色谱柱中过夜;
二、色谱柱的保存
1.短时间内色谱柱的保存
如果使用时间间隔不超过四天,则色谱柱无需特别的维护,只需根据最后一次测试使用的流动相或样品的性质,在使用后用纯甲醇、纯水或甲醇与水的混合溶液进行淋洗,直至基线走平约半小时即可。
2.长时间色谱柱的保存
如色谱柱长时间不用,则将其从HPLC仪中取下保存,取下前用合适的溶剂淋洗,洗去不适与保存色谱柱的洗脱液,如C18反相柱可以用纯甲醇或乙腈作为保存的介质,然后用塑料塞头将其塞紧,以免色谱柱内完全干燥。




推荐
热点排行
一周推荐
关闭