选择DPP4高表达细胞类型用于抗体结合和抑制分析

二肽基肽酶-4 (DPP4)是MERS-CoV进入宿主细胞的受体。为了更好地在细胞水平研究MERS-CoV，研究者们需先建立DPP4高表达株。A549, BHK21和VeroE6细胞被转染了不同浓度的DPP4 质粒。两天后，细胞被固定和染色。Celigo对所有样本进行全孔成像并识别单个细胞的荧光强度。数据以FCS文件导出至FlowJo 10软件进行转染效率分析。BHK-21在0.1 µg质粒浓度显示出了最高表达，因而被选择用于后续分析。



优化用于抗体结合和抑制检测的细胞数

优化细胞接种密度对于基于荧光的细胞分析至关重要。细胞数太少会降低数据的可重复性，细胞数太高可能会造成细胞堆叠，影响分析。研究者们将不同密度的BHK-21细胞接种过夜并转染DPP4, 通过Celigo的明场通道查看和分析细胞形态和融合率，最终选择5×10^3个细胞/孔作为最佳接种密度。



开发基于图像分析的病毒蛋白结合检测方法

为了确定病毒蛋白与DPP4高表达BHK-21细胞结合的适合条件，研究者们对多个参数进行了优化：蛋白构建体（MERS-CoV S三聚体或S1单体），蛋白量（0.1–10 µg）和染色方案（AL488抗His-Tag 抗体、不同的MERS-CoV单克隆抗体和AF488抗MERS-CoV S蛋白抗体 ）。在蛋白构建体方面，Celigo的荧光细胞图片显示MERS-CoV S三聚体和S1单体都能有效地结合到细胞上。然而荧光强度分析说明，与S1单体相比，MERS-CoV S三聚体显示出比对照组更大的峰移。此外，利用全长MERS-CoV S三聚体可以评估抗体与整个S蛋白的相互作用。因此，MERS-CoV S三聚体被用于后续的实验。