常用DAN探针制备的方法介绍--随机引物标记
随机引物标记(random primer labeling)是利用单链 DNA 与六核苷酸(hexamer)退火结合,以六核苷酸为引物,加入4种 dNTP,其中1种标有同位素或生物素,用 Klenow 片段催化合成带有标记的互补 DNA 链,标记率高而且不受琼脂糖影响。该法不适于标记 RNA。Feinberg 和 Vogelstein(1983)用 DNase Ⅰ溶解含有目的DNA片段的凝胶,乙醚沉淀DNA,用随机引物在 Klenow 片段的作用下制备了探针。
TaKahashi(1959)等用该方法成功地制备了 Biotin-dUTP 探针,并引入了 PCR 技术,用该探针进行斑点杂交可检测 Zoag 的 DNA 确定量,Southern 印迹杂交可检出7.4fg 的 DNA。
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