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【求助】 293t细胞活力不好
新手,刚养细胞,我看细胞形态还可以,就是长的很慢,培养基DMEN+10%FBS+0.1%双抗,基本上四天才能传,而且好多都是成簇的生长?求高手指点!【求助】 293t细胞活力不好
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【求助】 293t细胞活力不好
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字体: 小 中 大 | 打印 发表于: 2015-2-23 18:39 作者: mickeylin 来源: 分析测试百科网
293t-20x-2.jpg
最新回复
mickeylin (2015-2-23 18:39:44)
293t-20x-2 (1).jpg
mickeylin (2015-2-23 18:40:07)
293t-4x.jpg
mickeylin (2015-2-23 18:40:38)
传错了。。这个是10x的
293t-10x-2.jpg
zbboom (2015-2-23 18:41:36)
am10 (2015-2-23 18:41:54)
感觉细胞有些老化了,估计你们的培养条件不好,比如培养箱的温度波动大或者CO2含量变化大且时间长,导致细胞不能很好生长,或者你冻存细胞的时候,养的细胞太过头了,都有可能导致这种状态,FBS不好也会导致这样的状态
cbou876 (2015-2-23 18:42:12)
传细胞时传的太稀了!这个没问题,重新消化,传成两皿。
summerxx (2015-2-23 18:42:30)
1.可以把细胞密度调高点,如果你这是复苏以后的细胞密度,那就有点稀了。
2.传完细胞看一下,是不是成团,我觉得你没有消化好。正常消化完显微镜下看应该是单个的细胞。3.复苏细胞一般要恢复几代才能正常生长。
ilovegaga (2015-2-23 18:42:48)
mod=8048 (2015-2-23 18:44:11)
mickeylin (2015-2-23 18:46:00)
QUOTE:
你好,细胞老化是主要看细胞空泡多少么。。。我在高倍镜下看细胞膜上都有一点点两的像孔一样的东西是空泡么?谢谢mickeylin (2015-2-23 18:46:26)
1.可以把细胞密度调高点,如果你这是复苏以后 ...
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你好,这是293T前十代的细胞,是复苏传了两代以后的
mickeylin (2015-2-23 18:46:48)
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我重新消化,传代密度调高,现在好一些,但是感觉还是有点成簇生长,看看转染之后怎么样。。。谢谢
mickeylin (2015-2-23 18:47:05)
1.可以把细胞密度调高点,如果你这是复苏以后 ...
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请问一下,消化好是怎么个意思,需要完全把它从壁上消化下来,但是我怕消化时间长了对细胞有损伤,我现在都是直接胰酶加入覆盖细胞后吸走,用培养基把它从壁上吹打下来的,很容易就下来了。。。这样可以么?谢谢!
mybioon (2015-2-23 18:47:24)
重新复苏一管,多加点血清培养,等细胞长好了再传代,用含EDTA的胰酶消化,离心收集细胞后用枪充分重悬,使细胞分开成单个。传代后,保留20%左右细胞在培养瓶内
baidukk (2015-2-23 18:47:45)
avi317 (2015-2-23 18:48:03)
qqshepherd (2015-2-23 18:48:26)
mybioon (2015-2-23 18:48:49)
传代密度太低也会聚团生长的~
tianmei001 (2015-2-23 18:49:46)
293T做病毒是不需要加双抗的!你的培养基配方是不是少了点,可以加NEAA,丙酮酸钠,Glutamine
leifengta (2015-2-23 18:50:16)
【求助】 293t细胞活力不好