琼脂糖凝胶4B使用说明
琼脂糖凝胶4B
琼脂糖凝胶4B是用4%浓度琼脂糖制备成的球型颗粒，作为凝胶层析介质使用。
1 理化指标
项 目 | 指 标 |
基质 | 4%琼脂糖凝胶 |
分离范围 | 70000~20×106 (球蛋白) |
形状 | 球型 |
粒径 | 45~165 μm |
推荐流速 | 11 cm/h* |
耐压 | 0.018 MPa |
pH适用范围 | 4~9 |
化学稳定性 | 可耐8mol/L尿素、6mol/L盐酸胍 |
*检测条件： 层析柱10mm×300mm *柱床高5cm，25℃，流动相为0.1mol/LNaCl。
2 贮存
产品应密封贮存在4℃~25℃（保存溶液为20% 乙醇），通风、干燥、清洁的地方。不能冷冻。用过的柱子贮存在4℃（20% 乙醇）。保质期：5年。
3 应用
本产品为传统的琼脂糖介质，非特异性吸附低，回收率高，可多次重复使用等特点，用于分子量差异大、对分辨率要求不高的样品的凝胶层析纯化。
3.1 装柱
（1）让所有的材料和试剂达到室温。配制缓冲液。
（2）根据柱子大小取所需量的凝胶，用去离子水清洗掉20%乙醇，用缓冲液（按凝胶：缓冲液=3：1的比例）配成匀浆。
（3）将柱内及柱子底端用水或缓冲液润湿并保持一小段液位，务必使底端无气泡。
（4）用玻璃棒引导匀浆沿着柱内壁一次性倒入柱内，注意勿使产生气泡。打开柱子出液口，使凝胶在柱内自由沉降，连结好柱子顶端柱头。
（5）打开蠕动泵，让缓冲液用使用时流速的1.33倍的流速流过，使柱床稳定（注意压力不要超过填料最大耐压）。
3.2 平衡
让缓冲液以一定流速流过柱子，到流出液电导和pH不变。
建议使用离子强度为0.15或更大的缓冲液，以避免溶质分子和基质之间的任何不需要的离子相互作用。对于各Sepharose凝胶的推荐流速，请参考推荐流速越低，分离度越高。
3.3 上样
（1）样品用平衡液配制，样品一定要离心或过滤后上样。
（2）推荐的样品体积为总床体积的2-5%。
3.4 洗脱
用缓冲液洗脱，洗脱中保持流速、缓冲液组成不变。
3.5 再生
一般用缓冲液洗到平衡，可再次使用。
在一些应用中，诸如变性蛋白质或脂质的物质在再生过程中洗脱不掉。 这些可以使用下述步骤清除。
出现下面这些情况，是必须需要清洗再生的：
（1）背压增加；
（2）色谱柱顶部的颜色变化；
（3）分辨率降低；
（4）转换接头和凝胶表面之间出现空隙。
如果观察到增加的背压，在开始柱清洁程序之前先检查管路中的各个过滤阀、过滤膜是否被污染；
通过用0.1M NaOH以推荐线性流速洗涤柱子，除去沉淀的蛋白质，非特异性结合的蛋白质和脂蛋白。
3.6 注意
在装柱、使用和保存柱子的时候，始终要避免柱子流干气泡进入。
注意事项：
1.上样之前，样品必须经过膜过滤及去除色素，否则杂质及色素会被吸附到填料上，影响填料的正常使用。
2.在使用过程中，避免使用高浓度的强酸强碱，酸和碱的浓度应低于0.15摩尔。碱会使流速变慢。
3.不同的样品，吸附和洗脱方法不相同，可以根据相关的文献进行。
