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PCR是啥东西?

2021.6.09

  PCR是一种将特异DNA片段在短时间内进行大批量复制的生物技术,它与克隆有些相似,但又不尽相同。二者的区别主要在于PCR仅仅是一种试管反应,不涉及活细胞的运用。

  实施PCR反应需要准备的原料为:寡聚核苷酸引物、核苷酸原料、DNA聚合酶和目的DNA片段。

  现在说一下具体的步骤:

  首先将混合物加热到94摄氏度,这样做的目的是让目的DNA片段分裂为单链分子。然后我们需要再将温度降到60度左右,最低不要低于50度,这样的话已经裂开的这两条DNA片段的一部分又会重新结合起来,而没有重新结合的那部分则跟引物进行结合。

  然后再将温度提升到72度,这时候目的DNA的每条单链都会合成长片段的产物,在不断的循环之下,长片段会作为模板形成短片段,这样短片段数量会不断累积,直到原料耗尽。差不多30个循环后,每个初始的目的DNA分子就会得到2亿多个短片段。

  以上就是PCR反应的过程原理。

  尽管PCR功能很强大,但它也具有局限性。它能够复制的DNA片段的长度是有限制的,不能特别大,从研究者的角度来说,对于扩增长片段的DNA序列,克隆比PCR更有效。另外,被扩增的DNA边界序列必须已知,否则反应不能正常进行。

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