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PCR产物电泳条带为什么被“劈开”了

2023.3.30

PCR产物电泳条带为什么被“劈开”了
说明不是引物之间形成二聚体,而是第一对引物的设计有问题(特异性很差).如果一定要扩增那个区,建议引物的位置向两边放一放.如果你没有好的设计软件,建议到Primer3去试试(目前最好的免费引物设计).如果还是不行,把序列发给我,我帮你设计(我有专业软件,ABI primer express 3 和 Invitrogen Vector NTI 10)
通常是非特异扩增过多引起,提高退火温度试试
PCR产物放置过久考虑产物降解;如果是PCR后及时上样,考虑引物特异性较差或者模板不纯(包括降解以及掺有别的DNA序列)
如果用PCR产物做模板的话,量太大也会有这个现象。
胶没煮好也会这样

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