用酸沉淀法浓缩蛋白质实验——三氯醋酸沉淀法
| 实验材料 | |
|---|---|
| 试剂、试剂盒 | |
| 实验步骤 | 1. 在 1ml 样品中至少要含有 5mg 蛋白质。加 100 ul 100％ 的三氯醋酸（TCA），混匀； 2. 将蛋白质在冰浴中沉淀 30 min （或在冷冻箱内放置 15 min ）； 3. 10 000 ×g 离心 5 min； 4. 弃去上清并用吸管吸净残留液； 5. 将沉淀再悬浮于50～100％ 0.1N NaOH 溶液，混匀。 展开 |
| 注意事项 | 1. 用 TCA 沉淀蛋白质，所需最低的蛋白质浓度是 5 ug／ml。 2. 有时需要用 10％ TCA 或乙醇-乙醚（1：1）洗涤 TCA 沉淀的蛋白质，以除去 TCA。 3. 第 5 步不用 NaOH 溶液再悬浮 TCA 沉淀，而是用乙醇-乙醚（1：1 ）洗涤 TCA 沉淀 ，并用缓冲液再悬浮沉淀，可能更易操作。 4. 脱氧胆酸盐三氯醋酸（DOC-TCA）沉淀法是 TCA 沉淀法的一种变通形式，它可用于浓度 为 1 ug／ml 以下的蛋白质浓缩，该法使用范围更广。 1 ml 样品加 0.1 ml 0.15％ DOC。 混匀并在室温下放置 10 min。 加 50 ul 100％ TCA，混匀并在 10 000×g 离心 5 min。 DOC-TCA 沉淀反应不能在 SDS 存在的条件下进行。 展 |
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