流式细胞仪检测细胞凋亡实验——Annexin V/PI双染色法
流式细胞仪检测细胞凋亡可应用于：（1）鉴定细胞凋亡形态；（2）准确的进行凋亡细胞的计数；（3）进行特异的定性分析和定量分析。
| 实验方法原理 | 细胞凋亡早期改变发生在细胞膜表面，目前早期识别仍有困难。这些细胞膜表面的改变之一是磷脂酰丝氨酸（PS）从细胞膜内转移到细胞膜外，使PS暴露在细胞膜外表面。PS是一种带负电荷的磷脂，正常主要存在于细胞膜的内面，在细胞发生凋亡时细胞膜上的这种磷脂分布的不对称性被破坏而使PS暴露在细胞膜外。Annexin V是一种Ca依赖的磷脂结合蛋白，最初发现是一种具有很强的抗凝血特性的血管蛋白，Annexin V具有易于结合到磷脂类如PS的特性。对PS有高度的亲和性。因此，该蛋白可充当一敏感的探针检测暴露在细胞膜表面的PS。PS转移到细胞膜外不是凋亡所独特的，也可发生在细胞坏死中。两种细胞死亡方式间的差别是在凋亡的初始阶段细胞膜是完好的，而细胞坏死在其早期阶段细胞膜的完整性就破坏了。因此，可以建立一种用Annexin V结合在细胞膜表面作为凋亡的指示并结合一种染料排除试验以检测细胞膜的完整性的检测方法。 |
|---|---|
| 实验材料 | |
| 试剂、试剂盒 | |
| 仪器、耗材 | |
| 实验步骤 | 一、.细胞收集
二、细胞洗涤
三、细胞标记
3. 500～1 000 r/min离心5 min沉淀细胞孵育缓冲液洗1次。
4. 加入荧光（SA-FLOUS）溶液4℃下孵育20 min，避光并不时振动。
四、流式细胞仪分析
五、结果判断 |
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