三．操作方法
1．夹心式垂直电泳槽使用方法
1）清洗部件：用去污剂清洗长短玻璃板、胶模框及样品梳，用自来水彻底冲洗，再用去离子水不洗净，放置晾干或用滤纸擦干（注意不要留下纤维）待用。如有必要，也可先用5% KOH甲醇溶液（5g KOH溶于100ml甲醇）清洗玻璃板，再按以上步骤洗净。小心：KOH有腐蚀性，取用时应戴手套和面具。
2）组装电泳槽：
① 将四只固定螺杆插入带红色电极头贮槽框的孔中，然后将贮槽框仰放在桌上。
② 左手拿胶模框，右手从边上握住短玻璃板向下插入到胶模框的短槽（三边有槽的即是）内，然后以同样方法将长玻璃板插入到长槽（左右两边有槽的即是）内，注意手指不要接触玻璃板的凝胶面（以免留下油脂，使灌胶时产生气泡），压紧边框。
③ 将装好玻璃板的胶模框平放在仰放的贮槽框上，其下缘与贮槽框下缘对齐。
④ 将另一半贮槽框与桌上的贮槽框相合，并使胶模框上的凸出线位于贮槽框边的中间。
⑤ 装上四只螺母并拧紧，注意拧螺母时应用力均匀，最好用双手按斜线位置双双逐渐拧紧。
⑥ 将电泳槽垂直放于桌上，带短玻璃板的贮槽称上槽（阴极端），带长玻璃板的贮槽称下槽（阳极端），在玻璃板与胶模框间有一缝隙，此缝隙可用已熔化的2% 琼脂沿玻璃板外边两侧灌入，以防止漏胶。底部如留有气泡，可稍抬起一端，即可赶走气泡。（注意待琼脂完全凝固后才能倒入胶液灌胶。）
2．凝胶制备
1）15% 分离胶的制备
试剂名称 体积 终浓度
30% 丙烯酰胺液 5.0ml 15%
分离胶缓冲液 2.5ml 0.375M Tris-HCl
10% SDS溶液 0.1ml 0.1%
去离子水 2.4ml ——
10% APS溶液 60μl 0.06%
TEMED 6μl 0.06%
① 将上述试剂在小烧杯中依次混合。
② 一旦加入TEMED后，马上开始聚合，故应立即快速旋动混合物，使混匀后沿长玻璃板内侧缝隙加入（注意将长玻璃板内侧各处都沾湿，以防加隔离水层时水面不平），至与电极丝相平处，留出灌注积层胶所需空间（样品梳齿长加2cm）。
③ 用滴管在胶液上缓慢而小心地（切忌冲入下层胶液），加上一层约5mm厚的分离胶覆盖液（也可用水代替，可防止氧气扩散进入凝胶而抑制聚合反应），让其在室温下（最好在30~50℃）聚合（注意胶未凝聚前禁止摇动模具）。

④ 待胶凝聚后（水与凝胶层的界面消失后又再出现时，约15分钟），尽可能倒出覆盖液，用滤纸条吸干残留液体（注意不要留下纤维）。
2）4% 样品浓缩胶的制备
试剂名称 体积 终浓度
30% 丙烯酰胺液 1.35ml 4%
浓缩胶缓冲液 2.5ml 0.125M Tris-HCl
10% SDS溶液 0.1ml 0.1%
去离子水 6.0ml ——
10% APS溶液 60μl 0.06%
TEMED 6μl 0.06%
① 将上述试剂在小烧杯中依次混匀。
② 倒入模具中分离胶上，插入干净的样品梳（注意避免混入气泡），让其在室温下凝聚（约30分钟）。
3．样品处理
1）对照液：取一瓶 Genotropin (4IU)，加蒸馏水2ml，测A280应约为0.6（浓度约为0.6μg/μl）。取10μl与2X样品缓冲液10μl混匀，100℃水浴加热3分钟。上样量为10μl（约3μg）。
2）原料或成品：用蒸馏水配成1μg/μl的溶液，取10μl与2X样品缓冲液10μl混匀，100℃水浴加热3 分钟。上样量为10μl（约5μg）。
3）中间体液：
① 011、012样品：取样品液与2X样品缓冲液1:1混匀，100℃水浴加热3分钟。上样量为20~50μl，酌情加减，一般为30μl。
② 013样品：取样品液与2X样品缓冲液1:1混匀，100℃水浴加热3分钟。上样量为165/A280（μl），如下表：
A280 <3.5 3.5~5.0 5.0~6.0 6.0~7.5 7.5~9.5 9.5~13
上样量 50μl 40μl 30μl 25μl 20μl 15μl
注：当不知A280时，可按前一批上样量或上30μl。
③ 014、015样品：取样品液加1倍体积的水、2倍体积的2X样品缓冲液，混匀，100℃水浴加热3分钟。当A280<10时，上样量与同批013 样品相同，一般为30μl；当A280>10时，上样量为同批013样品的4/5。
④ 016S样品：将样品液稀释至A280≈1，取30μl与2X样品缓冲液30μl混匀，100℃水浴加热3分钟。上样量为30~40μl。

⑤ 016、017样品：将样品液稀释至A280为0.5~1.0，取30μl与2X样品缓冲液30μl混匀，100℃水浴加热3分钟。上样量为 20/A280（μl）。
⑥ 018sp样品：将样品液稀释至A280≈0.5，取30μl与2X样品缓冲液30μl混匀，100℃水浴加热3分钟。上样量为10/A280（μl）。