荧光共振能量转移FRET肽和寡核苷酸荧光标记的应用-2
FRET原理
荧光共振能量转移（FRET）是一种物理现象，在生物医学研究和药物发现中已经越来越流行。FRET是能量从供体分子（donor）到受体分子（acceptor）的无热量传输。供体分子是最初吸收能量的荧光基团，而受体是随后转移能量的荧光基团，这种共振相互作用发生在大于原子间的距离上，而没有转化为热能并且没有任何分子碰撞。能量转移导致供体的荧光强度和激发态寿命的减少，以及受体的发射强度的增加。以发生FRET的方式相互作用的一对分子通常称为供体/受体对。由于它对距离敏感，FRET被用于观察分子间相互作用。
图2.
从供体到受体分子的FRET过程图。水平线代表每个分子的离散电子能级。能级被标记为单峰态（S）或三重态（T），其下标分别为0，1或2（分别代表基态，第一激发态或第二激发态）。分子的电子通常处于基态S0。电子可以通过许多过程被激发到更高的能级，包括光吸收和化学反应。
尽管有很多影响FRET的因素，但要使FRET发生需要满足的主要条件相对较少：
供体和受体分子必须彼此接近（通常为10-100Å）
受体的激发光谱必须与供体的发射光谱重叠。它们重叠的程度称为光谱重叠积分（J）
供体和受体过渡偶极的方向必须近似平行
假设供体受体对是相匹配的，发生FRET所必需的最关键元素是供体受体对之间的紧密接近。Förster证明了过程（E）的效率取决于供体与受体之间距离的六次方的倒数，如以下等式所示：
E = R o 6 /（R o 6 + r 6）
其中Ro是能量传递一半时的Förster距离，r是供体与受体之间的实际距离。Ro的大小取决于体与受体的光谱性质。Förster距离在20到90Å之间时，对研究生物大分子最有用。
Tide Quencher™系列
尽管DABCYL已被用于开发各种FRET应用，但对于较长波长的染料（例如荧光素，罗丹明和花青素）的淬灭效率较低，限制了其在敏感的荧光FRET探针开发中的应用。另外，DABCYL的吸收光谱对环境敏感。我们已开发出耐用的Tide Quencher™受体染料，用于研发更长波长的FRET探针，Tide Quencher™染料是消除经典淬灭剂限制的绝佳选择。
Tide Quencher™染料的主要优点：
探索其他淬灭剂可能无法实现的FRET潜力
多种反应形式便于自我构建所需的FRET生物分子
与您所需的荧光供体完全匹配
性价比高
Tide Quencher™系列产品：
| 淬灭剂 | 激发（nm） | 消光系数（ε） | CF260 | CF280 |
| Tide Quencher™1 | 488 | 20,000 | 0.147 | 0.194 |
| Tide Quencher™2 | 512 | 21,000 | 0.100 | 0.120 |
| Tide Quencher™2WS | 515 | 21,000 | 0.100 | 0.120 |
| Tide Quencher™3 | 576 | 22,000 | 0.085 | 0.091 |
| Tide Quencher™3WS | 576 | 90,000 | 0.186 | 0.205 |
| Tide Quencher™4 | 604 | 23,000 | 0.146 | 0.183 |
| Tide Quencher™4WS | 604 | 90,000 | 0.149 | 0.136 |
| Tide Quencher™5 | 661 | 24,000 | 0.170 | 0.082 |
| Tide Quencher™5WS | 661 | 130,000 | 0.072 | 0.082 |
| Tide Quencher™6WS | 691 | 130,000 | 0.120 | 0.102 |
CF260是染料在260 nm处的校正因子，用于消除染料对260 nm处的吸光度的影响（用于寡核苷酸和核酸标记）
CF280是染料280 nm处的校正因子，用于消除染料对280 nm处的吸光度的影响（用于肽和蛋白质标记）
