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用分离的亚细胞组分分析蛋白质的磷酸化

2019.4.03
实验材料

样品

试剂、试剂盒

胞内缓冲液透化缓冲液

仪器、耗材

离心管

实验步骤

1. 分离细胞器。

2. 于 4℃ 用胞内缓冲液清洗细胞器样品 3 次,将相当于 1 mg 蛋白质的样品转至带螺帽的小离心管,放入冰盒。

3. 离心,吸去上清,加 200 μl 预热至 37℃ 的透化缓冲液,轻轻混匀,放入 37℃ 水浴箱 。

4. 加链球菌溶血素 O 储存液至终浓度 60 单位/ml,加冷 ATP 储存液至 100 μmol/L。

5. 加 [γ-32P] ATP 至终浓度 50~500 μCi/ml。

6. 加入要试验的试剂,如激酶/磷酸酶抑制剂、蛋白质激酶或者磷酸酶。

7. 制备免疫沉淀分析样品或者 PAGE 样品。

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