| 实验步骤 |
操作程序
1) 将膜制备物悬浮于所选的缓冲系统（如，磷酸缓冲液或 HEPES 缓冲液）中。缓冲液浓度应为 50 mmol/L,pH 应接近该缓冲液的 pKa。蛋白终浓度应为约 10 mg/ml。将此膜悬液保存于 4℃。
2) 将被试的各去垢剂配制成 10%(100 mg/ml) 的储液，再用缓冲液将各去垢剂储液稀释成 0.2%、1%、2% 和 6%。
注：1. 毛地黄阜苷只能溶至 4%。2. Boehringer Mannheim 公司有去垢剂试剂盒出售，内中包括有常用于分析和纯化膜蛋白的 9 种非离子型和 3 种兼性离子型去垢剂的试样。
3)
等体积的备去垢剂溶液（得自步骤 2) 与膜制备物的等分试样（得自步骤 1) 混合。在每一管中，膜蛋白的终浓度为 5
mg/ml，去垢剂的终浓度分别为 0.1%、0.5%、1%、3% 和
5%。再配制一份样品，用不含去垢剂的缓冲液稀释。这样，即可得到试管内的去垢剂与蛋白质之比（即 mg 去垢剂/mg 蛋白）为
0、0.2、1、2、6 和 10 的一个系列。
4) 混合物于 4℃ 下搅拌混合 1 h。
注：应避免起泡沫，因为这会使蛋白质变性。
5) 混合物于 4℃ 下 100000 g 离心 1 h。
6) 将上清移至洁净的试管中。各沉淀物分别重悬于等体积的缓冲液中。
7) 分别测定各上清及沉淀中的蛋白质活性。
注：比较各上清及沉淀中的蛋白质活性，观察随着去垢剂浓度的增加，该去垢剂是否能将蛋白质从膜上溶下来。应将蛋白质活性对去垢剂-蛋白质比作图。 |
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