立式高速冷冻离心机分离动物肝脏细胞的方法
动物肝脏细胞匀浆后,其成分大致可分为:一是完整的的细胞器,包括细胞核、线粒体、溶酶体、微粒体和分泌颗粒。二是膜相系统,包括细胞膜、内质膜和高尔基体等。在等渗介质中用匀浆器对动物肝脏细胞进行匀浆,通过立式高速冷冻离心机差速离心,各步沉淀中包含着不同的匀浆成分。分离过程如下:
*次离心:用50mL尖底塑料离心管,在立式高速冷冻离心机中,1000g,离心10min。
第二次离心:*次离心后得到的上清液,用50mL聚碳酸酯离心管,3000g,离心10min。
第三次离心:第二次离心后得到的上清液,用50mL聚碳酸酯离心管,6000g,离心10min。
第四次离心:第三次离心后得到的上清液,用50mL聚碳酸酯离心管,10000g,离心10min。
第五次离心:第四次离心后得到的上清液,用50mL聚碳酸酯离心管,20000g,离心10min。
第六次离心:第五次离心后得到的上清液,用50mL聚碳酸酯离心管,100000g,离心10min。
离心过程中,样品体积大,沉降路径长,要相应增加离心转速或延长离心时间。样品体积小,靠近离心管底部受到的离心力大,要相应降低离心转速或缩短离心时间。可用K值近似确定离心转速和时间。
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