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昆虫细胞转染实验

2020.8.17

实验材料 昆虫细胞


试剂、试剂盒 胎牛血清脂质体转染剂


仪器、耗材 培养皿锥形瓶培养箱离心机转子


实验步骤


1.  接种2×106个Sf9细胞于60 mm 培养皿,在含10%胎牛血清的完全培养液或无血清培养液中培养,于27℃培养30~60 min,让细胞贴壁。


2.  相应于毎一待转染的培养皿,吸取40 μl 无菌水,加入一支无菌聚苯乙烯管中,加入5 μl 线性化的AcMNPV DNA和5 μl 100 ng/μl 的质粒DNA。将Lipofectin 充分混匀后,往DNA溶液中加入50 μl,轻柔混匀,于室温温育15 min。


3.  在15 min 的温育期间,用1.5 ml 不含胎牛血清的完全培养液代替培养皿中的培奍液。


4.  往培养皿中遂滴加入Lipofectin-DNA复合物,同时轻柔旋转平皿加以混匀。于27℃温育4~5 h。

 

5.  往每个培养皿中加入1.5 ml 含10%胎牛血清的完全培养液(或含有5%胎牛血清的无血清培养液),在27℃加湿培养箱中温育60~72 h。

 

6.  从每个堉养皿中将转染上清(由培养液和病毒组成)转移至无菌的15 ml 锥形离心管中4℃ 1 000 g 离心10 min。将病毒上清转移至新的灭菌试管,4℃避光保存备用。


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