目的：规范生长激素中间体的电泳检测

一．仪器装置
1．电泳仪
2．夹心式垂直电泳槽
3．玻璃板：长14.5×11.5×2mm、短14.0×11.5×2mm
4．可调微量移液器
5．微量进样器
6．转移脱色摇床

二．试剂配制
1．丙烯酰胺液（30%T/2.7%C）
用天平分别称取58.4g丙烯酰胺（Acr）和1.6g N,N’-亚甲双丙烯酰胺（Bis），溶于120ml温热（37℃左右，以利于溶解Bis）的去离子水中，然后转移至200ml容量瓶中，补加去离子水至刻度，摇匀，用滤纸过滤后，检查其pH值应不大于7.0，贮存在棕色瓶中，4℃保存。每隔2个月重新配制。
小心：丙烯酰胺具有神经毒性，操作时应戴手套。如不慎接触皮肤，应立即用水和肥皂清洗。
2．分离胶缓冲液（1.5M Tris-HCl，pH8.8）
用天平称取36.3g三羟甲基氨基甲烷（Tris），溶于160ml去离子水中，用HCl调pH值至8.8~8.9（先加5ml浓HCl，再逐滴加1M HCl调节），用去离子水定容至200ml，置棕色瓶中4℃保存。
3．浓缩胶缓冲液（0.5M Tris-HCl，pH6.8）
用天平称取12.1g Tris，溶于160ml去离子水中，用HCl调pH值至6.7~6.8（先加8ml浓HCl，再逐滴加1M HCl调节），用去离子水定容至200ml，置棕色瓶中4℃保存。
4．10% 十二烷基硫酸钠溶液
用天平称取20.0g 电泳级十二烷基硫酸钠（SDS），加180ml去离子水，68℃水浴使溶解后，用去离子水定容至200ml，室温保存。
5．10% 过硫酸铵溶液
用天平称取0.50g过硫酸铵（APS），溶于5ml去离子水中，分装Eppendof管冰冻保存。
6．四甲基乙二胺（TEMED）液
7．分离胶覆盖液（（0.375M Tris-HCl，pH8.8，0.1% SDS）
取分离胶缓冲液25ml、10% SDS溶液1.0ml，混匀，加去离子水定容至100ml，室温保存。
8．1% 溴酚兰指示液
用天平称取1.0g溴酚兰（BPB），加 0.05M NaOH溶液3ml使溶解，用去离子水定容至100ml。
9．2X样品缓冲液（0.125M Tris-HCl，pH6.8，4% SDS，20% 甘油，10% 巯基乙醇）

取浓缩胶缓冲液2.5ml、10% SDS溶液4.0ml、甘油2.0ml、巯基乙醇1.0ml、溴酚兰指示液0.5ml，混匀，分装Eppendof管冰冻保存。(生物秀实验频道 www.bbioo.com)
注：非还原型电泳中样品缓冲液不加巯基乙醇，其它均相同。
10．电泳缓冲液（0.05M Tris，pH8.3，0.384M甘氨酸，0.1% SDS）
用天平称取12.1g Tris，57.6g甘氨酸，加10% SDS溶液20ml，再加去离子水定容至2L。（此溶液一般可使用4~5次，当电泳胶染色后出现较多杂带和本底时，应重新配制。）
11．染色液储存液（1% 考马斯亮兰R-250）
称取2.0g考马斯亮兰R-250，加去离子水溶解并定容至200ml，滤纸过滤（以除去颗粒状物质）。
12．染色液（0.125% 考马斯亮兰，50% 乙醇，10% 乙酸）
取染色液储存液62.5ml、乙醇250ml、乙酸50ml，加去离子水至 500ml。
注：50% 乙醇也可用45% 甲醇代替，但甲醇毒性比乙醇大，不建议使用。
13．脱色液I（50% 乙醇，10% 乙酸）
取乙醇500ml、乙酸100ml，加去离子水至1L。
14．脱色液II（5% 乙醇，7% 乙酸）
取乙醇50ml、乙酸70ml，加去离子水至1L。
15．银染试剂
1）固定液（50% 乙醇，0.02% 甲醛）：取乙醇250ml、37% 甲醛270μl，加水至500ml。小心：甲醛蒸汽有毒，含有甲醛的溶液应在通风橱中配制。
2）1% 戊二醛液：取25% 戊二醛液20ml，加水至500ml。
3）硝酸银溶液（用前新鲜配制）：称取0.8g硝酸银，加水4.0ml溶解，将此溶液加到0.1M NaOH溶液20ml和25% 氨水1.5ml的混和液中，用水稀释至100ml。
16．银染显色液
取1% 柠檬酸2.5ml、37% 甲醛270μl，加水至500ml。
17．终止液（10% 乙酸）
取乙酸100ml，加水至1L。