对于每天都沉浸在分子实验的科研人员来说，如果可以在早期就了解到样品精确的数量（浓度）和质量（纯度），将非常有助于实验的进展和有效的防止下游实验的失败。

　　虽然无论是用微量检测还是荧光计检测，您都可以在几秒钟内获得到DNA，RNA或蛋白质样品的浓度和纯度，但由于下游实验目的的不同，选择准确的测量方式将成为实验成功的关键步骤。

　　◆ 微量检测

　　微量检测是从根本上解决了科研者需用大量样本来评估核酸和蛋白样品的检测方式。

　　◆ 荧光计

　　荧光计是一种使用高灵敏度的定量分析法精确测量DNA，RNA和蛋白质的检测方式，它采用的荧光染料仅在与目标靶标结合时才会产生信号，从而最大限度地减少污染物的影响（包括降解的DNA或RNA）。

　　表1. Nano-500微量与荧光检测功能用于核酸定量的比较

　　微量检测

　　荧光计

　　概况

　　快速简单 -可直接测量纯化样品，无需稀释

　　特异性测量dsDNA，ssDNA，总RNA、microRNA浓度

　　技术原理

　　光吸收

　　荧光

　　工作流程

　　1.将样品移液到基座上

　　2.测量

　　3.读取吸光度

　　1.将样品与试剂混合

　　2.孵化2-5分钟；

　　3.读取荧光值

　　应用

　　对DNA，RNA和蛋白质的浓度和纯度进行评估

　　当样品浓度极低（＜2ng/ul）或需要更高的灵敏度或怀疑核酸污染物时（例如RNA中含有的DNA或dNTPs）

　　dsDNA定量范围（ng /μl）

　　2-15,000

　　0.01–1000

　　核酸样品纯度评估

　　样品纯度简单评估

　　A260/A280

　　A260/A230

　　（图1）

　　无法对样品纯度进行评估

　　（图2）

　　表2. Nano-500微量与荧光检测功能用于蛋白定量的比较

　　微量检测

　　荧光计

　　提供预编程的一些应用

　　1.直接定量A280

　　2.缺乏色氨酸和酪氨酸残基的蛋白质或肽的A205肽键吸光度

　　3.比色蛋白质测定：Bradford、BCA、Lowry

　　1.荧光检测可显示出蛋白质与蛋白质之间微小的差异（BSA、鸡卵白蛋白、鸡蛋溶菌酶、IgG等均可区分）；

　　2.检测结果不会被大多数污染物干扰，包括盐类、还原剂（DTT，β-巯基乙醇）、DNA和氨基酸，但不能清除洗涤剂。

　　表3. 哪种仪器最适合您的核酸定量和质量评估需求？

　　微量检测

　　荧光计

　　常规PCR

　　由于常规PCR已广泛应用，通常只需用微量检测来量化模板。

　　荧光计亦适用于常规样品，尤其是当样品中含有A260的污染物时（dNTPs，寡核苷酸，RNA等），其为优选。

　　定量PCR

　　微量检测可通过260/280、260/230等比值来判断核酸纯度，避免因样品问题导致的引起的扩增失败（例如苯酚等）。

　　荧光计可精确定量核酸浓度，但是由于缺少不能反应样品纯度，低纯度样品可能对PCR反应会存在抑制现象。

　　测序

　　通常可用微量来量化模板，除非样品在260nm处容易产生大量的污染物（例如DNA样品中的 RNA）。

　　如果样品在260nm处容易产生大量的污染物，则荧光计测定的高特异性是优选。

　　NGS

　　在库构建过程中，当允许不影响下游实验的污染物存在时，可用微量检测

　　可靠的NGS结果需要高度准确的模板浓度，荧光计的特异性和灵敏度更符合需求。

　　RT-qPCR

　　标准RNA提取不易受DNA污染，因此微量检测可用于确定下一步反应的RNA量。

　　荧光计检测的特异性和灵敏度适用于常规样品，当样品含有DNA污染或降解RNA（dNTP或NTP），则荧光计检测是优选。

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