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血凝仪的主要检测方法介绍

2021.12.17

   目前国内外各生产厂家生产的半自动血凝仪都是基于凝固法对血液凝固过程进行测量的。血液凝固是一系列凝血因子连锁性酶反应的结果。血液中的凝血因子以无活性酶原形式存在,当某一凝血因子被激活后,可使许多凝血因子按一定的次序先后被激活,彼此之间有复杂的催化作用,被称为“瀑布样学说”。这种“瀑布样学说”产生的激变在血液的生物物理特性上表现为,电阻增大(电流法)粘度增强(磁珠法),浊度上升(光学法)。由于电流法测量可靠性差,因此为磁珠法和光学法所替代。

  血凝仪,即血液凝固分析仪,是对血栓和止血进行实验室检查的仪器。止血与血栓分子标志物的检测指标与临床各种疾患有着密切联系,如动脉粥样硬化,心脑血管疾病、糖尿病、动静脉血栓形成,血栓闭塞性脉管炎、肺栓塞、妊娠高血压综合症、弥散性血管内凝血、溶血尿毒综合症、慢性阻塞性肺炎等。中医药关于活血化瘀的理论与治疗工作研究也都涉及止血与血栓问题。使用血凝仪对血栓和止血进行实验室检查成为必要。血凝仪分为全自动与半自动两类。

  血凝仪多采用生物学方法,即凝固法,将凝血因子激活剂加入到待检血浆中,使血浆发生体外凝固,血凝仪连续记录血浆凝固过程中的一系列变化(如光、电、机械运动等),并将这些变化信号转变成数据,用计算机收集、处理数据后得出检测结果。目前在血凝仪使用的凝固法大致可分成三类:光学法、电流法(也称钩方法)、黏度法(也称磁珠法)。

  

  1.光学法

  是当前血凝仪使用最多的一种检测方法。一束光通过样品杯,会发生透射和散射。样品杯中的血浆在凝固过程中,纤维蛋白原逐渐转变成纤维蛋白,其理学性状也会发生改变,透射光和散射光的强度也会发生改变。血凝仪根据这种由于血液凝固而导致光强度的变化来判断凝固终点的方法称之为光学法。光学法又可分成两种:透射比浊法和散射比浊法

  (1)散射比浊法 即根据待检样品在凝固过程中散射光的变化来确定凝固终点的检测方法。其基本原理是来自光发射二级管的光被样品反射或散射,散射光又被一光电二级管吸收,仪器将光强度转变成电信号,这些信号再被传送到一个监测器进行处理。发射光的二极管同接受光的光电二极管必须在一定角度。预温好的血浆同试剂快速混合,在混合的瞬间,散射光非常弱,随着标本中纤维蛋白凝块的形成,标本的散射光强度也逐渐增加,当标本凝固完全以后,散射光的强度就稳定下来。光电二极管接收这一光的变化,把它转变成电信号。

  (2)透射比浊法 即根据待检样品在凝固过程中吸光度的变化来确定凝固终点的检测方法。透射比浊法的原理同散射比浊法基本相似。来自光源的光经平行光管后变成平行光,此平行光透过待检样品后照射到一光电管上变成临时电信号,经过放大再被传送到一个监测器上进行处理。血浆同试剂快速混合,在混合的瞬间,吸光度非常弱,随着标本中纤维蛋白凝块的形成,标本吸光度也逐渐增加,当标本凝固完全以后,吸光度就稳定下来。仪器在血浆与试剂混合的瞬间,也就是吸光度最弱的时刻,将吸光度强度置为0,在血浆样品凝固完全以后,吸光最强的时候,将吸光度强度置为100%。0~100%之间的光强度变化被描成一条曲线,仪器可设定一个点所对应的时间为凝血时间。凝固终点的确定大致同散射比浊法。

  2.电流法

  电流法即是将待检样品作为电路的一部分,由于纤维蛋白具有导电性,可利用电流的断与否来判断纤维蛋白的形成与否,即判断凝固终点。这一方法的具体表现为:将两电极插入待检样品,其中一个电极可以上下运动。当两个电极都在血浆中的时候,电路是连通的;当其中一个电极向上运动离开血浆时,电路是断开的。往血浆中加入激活剂,血浆中纤维蛋白形成,此时可运动电极向上运动时,可钩起纤维蛋白丝。由于纤维蛋白丝是导电的,故此时电路仍可连通,此时仪器即可将其判为凝固终点。

  3.黏度法

   即在待检样品中加入小铁珠,利用变化的磁场使小铁珠产生运动,随着血浆的凝固,血凝黏度增加,小铁珠的运动强度逐渐减弱,仪器根据小铁珠运动强度的变化来确定凝固终点。

  血凝仪的发展方向与全自动生化分析仪一样——进一步提高仪器的检测的自动化程度,如将自动离心机处理的标本通过传输装置运至全自动血凝仪;ID条形码识别装置识别样本,根据不同的测试要求对样品进行分配,由盖帽贯穿式进样机吸样后血凝仪自动进行检测,计算机对结果进行分析、报告并传输至指定场所;提高仪器检测的灵敏度与特异性,使检测结果更符合检测实际;逐步缩小不同仪器检测结果的差异,增强检测结果的可比性,进一步完善检测的标准化;建立血凝检测的网络化,使同一患者在不同的医疗单位的检测结果可以交互使用,有利于减轻患者的负担及疗效的判断;对于在中国销售的血凝仪,应促使生产厂实现人机操作界面的汉化,以利于血栓与止血检测的自动化的普及和提高。

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