长奈瑟菌属于奈瑟菌属,从人体分离的大多数奈瑟菌被认为是健康人群口咽部黏膜共生定居的细菌,长奈瑟菌同样也是口咽部的正常菌群,但在少数情况下可引起败血症､骨髓炎和感染性心内膜炎｡1969年有研究者首次对该菌进行了描述,直到1983年研究者才报道了该菌的潜在致病性,主要见于牙科手术后及介入性心血管操作后,长奈瑟菌所致感染的病例国内报道甚少,目前国内只有两例引起感染性心内膜炎的报道,未有该菌引起其他疾病的报道[1-2]｡国外作为个案报告也较少,散在分布在多个多家,国外的报告中大多引起心内膜炎[3-4],还可以引起尿道炎､关节炎､腹膜炎等[5-6]｡本案例是从1位感染性心内膜炎患者血液中分离到该菌,从临床病史资料､菌种鉴定等方面进行如下报道,希望能引起临床微生物工作者的注意｡

1临床病史资料

患者,男,36岁,因“反复发热50d,咳嗽､咯痰1周”入住华西医院感染科｡患者于50d前受凉后出现发热,体温未测,伴畏寒､寒战,口服药物后好转(具体不祥),但症状间断反复,最高体温39℃,曾使用“小柴胡､头孢”等治疗,症状好转但仍反复发热,1周前出现咳嗽､咯白色泡沫痰,入院当天外院心脏彩超显示二尖瓣前叶稍强回声团,考虑赘生物(请结合临床,建议治疗后复查),左心房增大,左心室收缩功能测量值正常,舒张功能正常,心包积液(少量)｡患者为进一步诊疗就诊于本院｡患病以来,体质量下降约3kg｡既往一般情况良好,无心脏疾病史,近期无拔牙病史｡入院查体:体温36.4℃,脉搏102次/分,呼吸20次/分,血压80/56mmHg,心脏二尖瓣区可闻及杂音,余无异常｡初步诊断为发热待查:感染性心内膜炎可能性大｡实验室检查血常规白细胞15.33×109/L,参考范围(3.5~9.5)×109/L,中性粒细胞百分比81.0%(参考范围40%~75%),C-反应蛋白120mg/L(参考范围<5mg/L),PCT100ng/mL(参考范围<0.046ng/mL),白细胞介素-635.76pg/mL(参考范围0~7pg/mL),乙型流感病毒阳性,生化清蛋白21.5g/L,心肌酶谱增高,其他生化免疫结果无明显异常｡入院3d后复查心脏彩超显示心瓣膜病,二尖瓣脱垂､穿孔继发中度反流｡入院后患者最高体温40℃,先后给予左氧氟沙星,哌拉西林他唑巴坦,头孢曲松联合万古霉素联合抗感染,奥司他韦抗病毒治疗及其他对症支持｡经治疗后,患者发热症状明显好转,患者炎性指标明显下降,转入心脏外科行主动脉瓣及二尖瓣机械置换术+心脏表面临时起搏导线安置术,术后继续抗感染治疗｡

2细菌学检查及结果

2.1细菌培养与鉴定 患者于入院即刻和入院5h后分别各采集2套外周血送培养,共4套血培养送检｡4套血培养的需氧瓶分别于放入培养箱后22h32min､33h25min､19h38min､20h8min报阳,厌氧瓶均阴性｡涂片染色可见革兰阴性球杆菌(见图1),转种血平板和巧克力平板,35℃,5%CO2培养,24h后血平板巧克力平板上可见1~2mm､淡黄色､圆形､半透明､黏稠小菌落(见图2),麦康凯平板不生长｡取纯培养革兰染色为革兰阴性球杆菌(见图3),氧化酶阳性,触酶阴性,补充微量生化管反应硝酸盐还原试验阳性,不发酵葡萄糖,按一般阴性杆菌上VITEK2-CompactGN卡鉴定为杀蛙气单胞菌,鉴定可信度95%｡纯培养经BrukerMS质谱仪鉴定后为长奈瑟菌硝还亚种,分值为1.902分(见图4)｡该菌β-内酰胺酶阴性,药敏采用纸片扩散法法,参照脑膜炎奈瑟球菌判断标准,对美罗培兰､复方磺胺甲噁唑､头孢曲松､氯霉素敏感｡

2.2分子生物学方法鉴定 采用16SrRNA序列分析法,将细菌送成都擎科梓熙生物科技有限公司测序,正向游引物名称27F,5′-GAGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3′反向游引物名称1492R,P25′-TACGGCTACCTTGTTACGAC-3′,目的片段约为1500bp｡PCR反应体系50μL:PCRMix25μL,正反向游引物各1μL,模板DNA1μL,dH2O22μL｡PCR反应条件:98℃预变性3min;98℃10s,55℃15s,72℃20s共35个循环;72℃延伸5min｡反应结束后,取5μL扩增产物,用1%琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物的特异性,用数字凝胶成像系统记录实验结果｡将PCR产物电泳条带切割所需DNA目的条带,纯化PCR产物用引物直接测序｡测序结果在美国国立生物技术信息中心数据库(NCBI)网站中用BLAST进行序列比较,选取比较长度1137bp,分析结果为长奈瑟菌硝酸盐还原亚种(Neisseriae-longatesubsp.nitroreducensstrain,NR104944.1),鉴定相似度为99.83%｡