真菌DNA的提取

　　1.实验试剂

　　(1)DNA提取液:0.2M Tris-HCl(pH 7.5),0.5M NaCl,0.01M EDTA,1%SDS

　　(2)3M NaAc

　　(3)TE:10 mmol/L Tris-HCl pH8.0,1 mmol/L EDTA

　　(4)酚(pH8.0):氯仿:异戊醇(25:24:1)

　　(5)氯仿:异戊醇(24:1)

　　(6)异丙醇

　　(7)无水乙醇

　　(8)75%乙醇

　　(9)RNaseA

　　2.实验步骤

　　(1)取真菌菌丝0.5g, 在液氮中迅速研磨成粉

　　(2)加入4mL提取液,快速振荡混匀

　　(3)加入等体积的4mL的氯仿:异戊醇(24:1),涡旋3～5min(此处是粗提没有加酚,可以节约成本)

　　(4)1000rpm,4℃,5min

　　(5)上清用氯仿:异戊醇(24:1)再抽提一次(10,000rpm,4℃离心5min)

　　(6)取上清,加入2/3倍体积的-20℃预冷异丙醇或2.5倍体积的无水乙醇沉淀, 混匀, 静置约30 min

　　(7)用毛细玻棒挑出絮状沉淀,用75%乙醇反复漂洗数次,再用无水乙醇漂洗1次,吹干,重悬于500ul TE中

　　(8)加入1ul RNaseA (10mg/mL),37℃处理1h

　　(9)用酚(pH8.0):氯仿:异戊醇(25:24:1)和氯仿:异戊醇(24:1)各抽提1次(10,000rpm,4℃离心5min)

　　(10)取上清,1/10V 3M NaAc,2.5V体积的无水乙醇,-70℃沉淀30min以上

　　(11)沉淀用75%乙醇漂洗,风干,溶于200ul TE中,-20℃保存备用