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高效毛细管电泳仪常见问题解决方案

2019.3.04

      高效毛细管电泳仪常见问题解决方案:

一、无电泳峰:

  1、检查结果:没有电流。

        可能原因:毛细管堵塞或断裂。

        解决方案:用水冲洗毛细管,观察是否有水流出。若无水流出,拆下卡盒检查毛细管两端和窗口是否断裂。若毛细管没断裂,可用水反向高压冲洗。缓冲液需过滤,将样品过滤或离心去除其中的颗粒。

  2、检查结果:电流波动很大,甚至几乎消失。

        可能原因:缓冲液中有气泡产生或区带中样品析出。

        解决方案:将缓冲液超声脱气,如果还有此现象发生,则可能是区带中样品析出,可降低样品浓度。对于在缓冲液中溶解度不高的样品,需在缓冲液中加入添加剂。

  3、检查结果:电流初始值较小,后逐渐增大。

        可能原因:样品进样量过大。

        解决方案:减少进样量。

  4、检查结果:电流正常。

        可能原因:样品浓度过低。

        解决方案:使用高浓度样品测试,如果无法解决则有可能是以下其它原因。

  5、检查结果:电流正常。

        可能原因:检测波长设置不正确。

        解决方案:确认被分析物的特征吸收,检查检测波长设置。

  6、检查结果:电流正常。

        可能原因:分离极性错误。

        解决方案:对于蛋白质样品,注意蛋白质在分离条件下其PI和所带电荷。对于核酸样品,通常条件下会带负电荷。

  7、检查结果:电流正常。

        可能原因:样品在毛细管内壁吸附。

        解决方案:对于蛋白质和核酸样品,应尽量采用涂层毛细管、极端pH条件或动态涂层,防止样品吸附。

  8、检查结果:电流正常。

        可能原因:光学检测器或光纤损坏。

        解决方案:进行标准样品测试,如果没有对应结果出现,则可能存在硬件问题。

二、电泳峰拖尾:

  1、可能原因:毛细管窗口未开或窗口位置不正。

        解决方案:打开毛细管检测窗口或调整窗口位置。

  2、可能原因:样品在毛细管内壁吸附。

        解决方案:对于蛋白质和核酸样品,应尽量采用涂层毛细管、极端pH 条件或动态涂层,防止样品吸附。

三、电泳峰不对称:

  1、可能原因:毛细管入口切口不平齐。

        解决方案:重新切割毛细管入口。

  2、可能原因:缓冲溶液与样品溶液电解率差别过大。

        解决方案:采用缓冲液作为样品溶剂。

四、电泳峰过宽:

  1、检查结果:降低样品进样量,有改善。

        可能原因:样品浓度太大。

        解决方案:可降低样品浓度或减少进样量。

  2、检查结果:降低样品进样量,无改善。

        可能原因:样品本身性质不均一。

        解决方案:此原因主要是针对蛋白质样品,小分子样品发生的概率较低。

五、迁移时间不稳定:

  1、检查结果:出峰时间不稳定且无规律。

        可能原因:缓冲液与毛细管内壁平衡较慢。

        解决方案:每次样品运行之间避免用NaOH冲洗毛细管。

  2、检查结果:出峰时间依次后延。

        可能原因:样品中物质易在毛细管内壁吸附。

        解决方案:首先在每次样品运行之前用0.1N NaOH溶液短时间冲洗毛细管,观察迁移时间能否重复。如果效果不佳,使用涂层毛细管或将样品再次处理。

六、峰形和出峰时间不稳定:

  1、检查结果:更换缓冲液种类,峰形和出峰时间稳定。

        可能原因:缓冲液不稳定、易电解或样品在原缓冲液条件下不稳定。

        解决方案:更换其它种类的缓冲液。

  2、检查结果:更换缓冲液种类,峰形和出峰时间仍不稳定。

        可能原因:样品中物质易在毛细管内壁吸附。

        解决方案:采用涂层毛细管或对样品进行前处理。

七、电流泄漏:

  1、检查结果:毛细管断裂。

        可能原因:毛细管内缓冲液流出,造成电流泄漏。

        解决方案:更换毛细管,并用水清洗光纤头和检测窗口。

  2、检查结果:毛细管无断裂。

        可能原因:实验环境湿度过大。

        解决方案:使用抽湿机或空调。湿度过大时,可在仪器关闭时放置干燥剂,但仪器运行时一定要将干燥剂取出。

八、无法加气压:

  1、检查结果:更换后问题解决。

        可能原因:瓶颈处有液体,导致瓶塞易滑。

        解决方案:向瓶中装液体时不要过满,也不要沾湿瓶颈。

  2、检查结果:若瓶塞无问题,可先采用真空方式,若真空方式可使用,但压力仍不可用。

        可能原因:压力系统存在问题。

        解决方案:检修。

九、迁移时间可重复,但峰面积重复性不好:

  1、检查结果:重新切割毛细管入口,问题解决。

        可能原因:毛细管入口切口不平齐。

        解决方案:重新切割毛细管入口。

  2、检查结果:重新切割毛细管入口,问题仍然存在。

        可能原因:若电动进样可保持重现,则压力控制或气路存在问题。

        解决方案:检修。

十、毛细管或电极易折断:

  1、可能原因:瓶盖老化。

        解决方案:换瓶盖。

  2、可能原因:电极不垂直。

        解决方案:将电极拉直。

十一、冷却液泄漏:

  1、可能原因:卡盒内垫圈和卡子漏装或装错顺序。

        解决方案:严格按安装顺序安装。

  2、可能原因:仪器内部管路密封不严。

        解决方案:检修。

   

 


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