单 克 隆 抗 体 的 制 备——杂交瘤培养上清的筛选分析
| 实验步骤 |
附 加 材 料（其他材料见基本方案 2) 在 9 6 孔板中生长的杂交瘤（见基本方案 2) 添 加 10 mmol/L HEPES的 DMEM-2 0 完 全 培 养 基（附 录 1) 多道移液器和9 6 孔板，可选的 1.在倒置显微镜下观察生长的杂交瘤的孔数。确定是对所有孔进行细胞筛选还是只筛选长有杂交瘤的孔。 2.将生长的杂交瘤在CO2 培养箱中培养≥ 2 d，以使抗体达到饱和滴度。 3.用微量移液器从每个孔中取IOOmI 培养上清用于检测或筛选分析，如 ELISA (单元1.1 ) 或间接免疫荧光法（单 元 4.1)。 每操作一个孔需更换新的枪头。如果是对所有孔进行细胞筛选，使用多道移液器可以方便地将培养上清移入另一个 9 6 孔板中。注意保持样品的顺序一致，行 、列标签明确。如需对大量样本进行筛选，可以将几个孔的样品合并入一个孔。一般情况下，检测结果中只有小于 1 % 〜5 % 的杂交瘤可以表达具有所需特异性的抗体（此时的抗体还不是单克隆抗体）。 4.当完成一整块孔板的取样后，用 新 鲜 的 添 加HEPES的 DMEM-20完全培养基培养液填满孔板，再对下一块孔板进行操作（见基本方案 2 , 步 骤 23)。 展 |
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