减少HPLC分析中乙腈用量方法（二）
减小色谱柱的尺寸规格
通常在HPLC分析中，经常使用直径4.6mm的柱子。而在保持分离度不变的条件下，通过减小色谱柱的尺寸可减少流动相的消耗量。从图4中可以看出，流动相的消耗量将随着色谱柱内径的减小而相应减少，具体如下所示：
4.6 mm I.D.→3.0 mm I.D.→2.0 mm I.D.
100%→43%→19%。
尽管2mm内径的色谱柱只适合用于半微量高效液相色谱系统， 但是3mm内径的色谱柱可用于常规的液相色谱系统，因此使用3mm内径的色谱柱可以作为减少流动相用量的方法之一。
而且减小色谱柱的内径还可以增加峰高度和提高灵敏度。当使用3mm色谱柱时，进样量仅为4.6mm柱的40%就可以达到与4.6mm柱相同的峰高度。
图4. 不同内径色谱柱对溶剂用量的影响。
色谱条件如下：
色谱柱：TSKgel ODS-100V 3μm；（4.6 mm I.D.×15cm）；（3.0 mm I.D.×15cm ）；（2.0 mm I.D.×15cm）。
流量：1.0 ml/min（4.6 mm I.D.）； 0.43 ml/min（3.0 mm I.D）；0.19 ml/min（2.0 mm I.D.）。
检测器：UV；检测波长：254 nm；柱温：40℃。
进 样：5μl（4.6 mm I.D.）；2μl（3.0 mm I.D.）；1μl（2.0 mm I.D.）。
样品：1. 苯酚（40 mg/L）；2. 邻苯基苯酚（5 mg/L）；3. 萘（20 mg/L）；4. 联苯（5 mg/L）。
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