毛细管电泳的主要特点是柱效高（N＞105～106）、分析时间短，所用样品量和试剂消耗少，操作模式多，更容易改变背景电解质，在线检测和自动化，使其成为同 HPLC 互补的分析技术，在生命科学领域显示出很好的应用前景。对肽和蛋白质的分析已经从对标准样品混合物的初步优化研究朝着应用方向发展，如定量测定重组蛋白质及其污染物，CE／MS 用于蛋白质的表征，CE-免疫分析，配体-生物分子结合研究以及酶活性分析。在基因工程、生化、临床、天然产物的分析方面已得到了较广泛的应用，成为基因工程领域中对重组蛋白生产的监控、下游处理和最终产物分析的最有吸引力的技术之一。在临床化学上用于内源性肽的分离、血红蛋白病诊断等。在食品分析中用于奶蛋白、大豆水解产物等的分析。
来源：《蛋白质技术手册》
| 实验材料 | 蛋白质溶液 |
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| 仪器、耗材 | 毛细管电泳仪 |
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| 实验步骤 |
「操作条件选择」具体见「其他」
1. 毛细管电泳柱的制备：清洗、反应与柱平衡；
2. 移开进样端的缓冲溶液池，换上样品管；
3. 使用低压或电迁移方式进样；
4. 再换上缓冲溶液池；
5. 施加分离所需的电压。 进行电泳分析。 展开 |
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| 注意事项 |
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| 其他 |
操作条件选择
1. 毛细管尺寸
最常用的为内径为 25～75 um 熔融石英毛细管，从分析时间上考虑，毛细管应尽可能得短，常用的有效长度（进样端至检测窗之间的距离）为 20～50 cm。
2. 高压电源
HPCE 所用的高压电源要能提供 30 kV 的直流电压和 200～300 uA 的电流。欲获得迁移时间的高重现性，须使电压稳定在 ±0.1％。电源极性应能切换。恒压方式最为常用，当进行等速电泳或温度不能很好控制时，则应采用恒流或恒功率方式，从而获得恒定的迁移时间。
3. 温度控制
由于进样和迁移时间决定于溶液的黏度，应将温度控制在 ±0.1℃，这对于操作的重现性是很重要的。采用液体恒温较气体恒温更为有效。
4. 进样量
样品区带长度应该小于毛细管长度的 1％～2％。样品超载会使峰变宽，峰形畸变。
5. 进样方式
采用流体力学的方式，进样量基本不受样品基质的影响；电迁移进样时，进样量决定于每一个组分的电泳淌度，应注意歧视效应带来的影响。
6. 样品预浓缩
在等速电泳和等电聚焦分析中，样品在稳态时可被浓缩许多倍，有利于紫外检测分析，但在毛细管区带电泳中，样品区带会展宽，因此常需要采用样品堆积、等速电泳和色谱法，通过对低电导介质的电动进样或压力进样来达到样品堆积的目的。非连续的缓冲系统被用于柱上低浓度样品的浓缩，进样体积较常规方法要大 30 倍。采用整个毛细管进样技术，样品可以浓缩 400～1000 倍。
瞬态等速电泳浓缩既可采用典塑的等速电泳电解质系统，也可以在样品中补充高淌度的与分离的样品电荷符号相同的离子（co-ion）， 而电解质的同号离子具有低淌度。在电泳过程中，由等速电泳模式逐渐转变为区带电泳模式。
色谱法预浓缩是先将样品捕集于一反相或亲和填料，然后用少量溶剂洗脱下来，同时使样品得到净化，如蛋白 G 和结合亚胺二乙酸金属螯合功能团的固定相。采用很低浓度的缓冲液和孔径非常小的聚丙烯酰胺凝胶进行浓缩，样品中的水扩散入凝胶，盐分同时被脱除，可适用于少量样品的处理。 展开 |
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