细胞传代实验——细胞培养技术
细胞传代实验可用于:(1)医学研究;(2)提供细胞种。(3)进行细胞生物学研究。
实验方法原理 | 培养细胞传代根据不同细胞采取不同的方法。贴壁生长的细胞用消化法传代;部分贴壁生长的细胞用直接吹打可传代;悬浮生长的细胞可以采用直接吹打或离心分离后传代,或用自然沉降法吸除上清后,再吹打传代。 |
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实验材料 | |
试剂、试剂盒 | |
仪器、耗材 | |
实验步骤 | 1. 贴壁细胞的消化法传代:
(3)向瓶内加入适量消化液(胰蛋白酶或与EDTA混合液)轻轻摇动培养瓶,使消化液流遍所有细胞表面。
(5)消化最好在37℃或室温25℃以上环境下进行。
(7)吸除或倒掉消化液,如用EDTA消化,需加Hanks液数毫升,轻轻转动培养瓶把残留消化液冲掉。
(9)用弯头吸管,吸取瓶内培养液,反复吹打瓶壁细胞,吹打过程要顺序进行。
(11) 计数,分别接种在新的培养瓶内。
2. 悬浮细胞的传代:悬浮细胞传代可离心收集细胞后传代,或直接传代。
(2) 离心800~1000 rpm,5 min。
(3) 弃去上清,加新的培养液到离心管内,用吸管吹打形成细胞悬液。
(4) 计数,分别接种在新的培养瓶内。
(5)直接传代即让悬浮细胞慢慢沉淀在瓶底后,将上清液吸掉1/2~2/3,然后用吸管吹打形成细胞悬液后再传代。
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注意事项 | 1. 胰蛋白酶要预温,温度37℃左右为宜。
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其他 | 根据细胞生长的恃点,传代方法有3种:悬浮生长细胞传代、半悬浮生长细胞传代(Hela细胞)、贴壁生长细胞传代。 培养细胞传代根据不同细胞采取不同的方法。贴壁生长的细胞用消化法传代;部分贴壁生长的细胞用直接吹打可传代;悬浮生长的细胞可以采用直接吹打或离心分离后传代,或用自然沉降法吸除上清后,再吹打传代。 |
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