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凯氏定氮仪检测食品蛋白质含量实验报告

2019.5.10

凯氏定氮仪检测法是测定食品中蛋白质含量的经典方法,测定结果稳定,准确。但操作烦琐,样品消化费时费事,消化时排放的SO2直接危害操作人员的身体健康。而全自动蛋白质分析仪价格昂贵,目前尚难普及。本文用KDY-04(A)定氮仪对食品中蛋白质含量进行测定,结果与经典凯氏定氮法差异无统计学意义,且操作简便,结果准确,分析速度快,消除了空气污染,可用于批量样品中蛋白质的测定。

1　材料与方法
1·1 　仪器与试剂　KDY-04(A)定氮仪;样品装置:4孔消化器;盐酸标准溶液:c(HCI)=0·0500mol/L;硫酸(ρ20=1·84g /ml);氢氧化钠溶液(400g/L);硼酸溶液(20g/L);指示液:1份甲基红乙醇溶液(1g/L)和5份溴甲酚绿乙醇溶液(1g/L),临用时混合;催化剂:硒粉或硫酸钾+硫酸铜(10+1);过氧化氢(30%)。
1·2　测定方法
1·2·1　样品消解　准确称取 0·5~2·0g混匀固体样品或吸取5·0~10·0ml液体样品于干净的消化管内,加0·5~1·0g硒粉或10g硫酸钾+1g硫酸铜,10ml硫酸, 摇匀,加10ml过氧化氢,混匀,将消化管放入消化器,放上装好密封圈的排污管,打开抽气三通进水,使抽气三通处于吸汽状态。接通电源,进行消化,如遇难消化的奶粉等样品,可于消化过程中适当增加过氧化氢的加入量,至消化液呈透明蓝绿色液体,关闭电源,冷却,定容至100ml。此过程约需1~2h。

1·2·2　测定　打开电源,按仪器说明书调试仪器进入待机状态(约0·5min)。把装有50ml硼酸溶液及2~3滴指示液的三角瓶放到接收托盘上,接收管插入液面,再将内装适量消化样品的消化管放到蒸馏器上, 加20ml纯水及消化时硫酸5倍量的氢氧化钠液,打开蒸汽开关进行蒸馏。当流出液至150ml左右时下移接收瓶,使接收管脱离液面,用纯水冲洗接收管,继续蒸馏0·5min,结束。取下消化管,关掉蒸汽开关,仪器还原到待机状态。馏出液用0·0500mol/L的盐酸标准溶液滴定至淡紫色为终点,计算蛋白质含量。同时做试剂空白实验。
2　定氮仪检测实验结果
2·1 　方法对比　分别用经典的凯氏定氮法和KDY-04(A)定氮仪测定不同种类样品的蛋白质含量。2种方法对同一样品的测定结果差异无统计学意义 (t=0·361,P>0·05)。(表1)。2·2　精密度测定取蛋白质含量不同的样品,每一种样品平行测定6次,结果见表2。测定结果的相对标准偏差(RSD)均<2%。2·3准确度测定取蛋白质含量不同的样品,加入一定量的硫酸铵标准物进行加标回收试验,经测定回收率为 97·6%~101·9%。(表3)。3　讨论经典的凯氏定氮法测定蛋白质,装置复杂,程序繁琐,消化时间长,对环境污染较大,蒸馏过程较难控制,易发生倒吸现象而致实验失败。而用KDY-04(A)定氮仪测定蛋白质则克服了以上的不足,采用封闭消化,样品不易受污染,也消除了环境污染;一次可消化多个样品;不会出现蒸馏倒吸现象,提高了工作效率。消化过程中加入适量的过氧化氢,使反应更加充分、快速,消化更彻底。且仪器价格相对便宜,适于基层单位应用。可视样品中蛋白质含量高低,适当增减取样量或测定样品体积。无催化剂硒粉时,可使用硫酸铜和硫酸钾作催化剂。