基因扩增实验的相关内容介绍

　　1.PCR热循环仪 2. 移液器（0.1-2.5μL）3.PCR板

　　实验 试剂

　　1．10×缓冲液：500mmol/LKCI、100mmol/LTriS·HCI(pH8.3，室温）、15mmol/LMgCl2

　　2.dNTPMix：2.5mmol/LdATP、2.5mmol/LdCTP、2.5mmol/LdGTP、2.5mmol/LdTTP

　　3.Tag酶5U/μL：

　　4.DNA模板1ng／μL：

　　5.引物1

　　6.引物2

　　7.引物溶液 浓度2uM

　　实验步骤

　　1．在200ulEppendorf管内配制20ul反应体系

　　2．按下述程序进行扩增

　　94℃预变性3min；94℃变性30s；58℃退火30s；72℃延伸1min30s30cycle；72℃延伸4min；4℃ pause

　　注意事项

　　1． 引物设计应具有 特异性，依靠引物设计软件进行引物设计；引物分装成多管，不宜反复冻融多次；

　　2．PCR反应的各种成份不能遗漏，操作应戴 手套，冰上操作；

　　3．根据引物的 Tm值和扩增片段长度以及 PCR仪的特性来设定PCR循环条件；

　　4．注意分析 电泳检测PCR产物时出现拖带或非特异性扩增带、无DNA带或DNA带很弱的可能原因。