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【求助】蛋白电泳跑到一半但不不再往下跑了
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各位战友,我最近在跑蛋白电泳时,总是在跑到一半时,所有小蛋白包括小分子量marker,都积聚在一条线上,非常细(如图),继续跑这一条线平行的下移,不再分开。让人觉得所有的蛋白跑到这条线上就被截住了。请问是什么问题啊?我把试剂全换了,但还是有种问题,是电泳槽的问题吗?谢谢!
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76748440.jpg
最新回复
eric930 (2013-5-30 16:09:38)
正常情况,分离胶浓度的限制。
建议看看电泳的基本原理。
小游abc (2013-5-30 16:10:21)
QUOTE:
谢谢您的指导,可是以前也跑的不是这样的,分离胶浓度是怎么限制的啊?不好意思,我想不出什么原因!而且marker在跑到过程中还会多出一条带就是那条细带,当这条细带赶上marker时,他们就合二为一了,越来越细,跑完就成图上那样了!小游abc (2013-5-30 16:10:42)
marker是16kD的
小游abc (2013-5-30 16:11:10)
95630517.jpg
小游abc (2013-5-30 16:11:48)
谢谢您的指点,这张标出10kD的位置了!
30365277.jpg
DDD (2013-5-30 16:12:18)
多少浓度的分离教?
小游abc (2013-5-30 16:13:01)
QUOTE:
12%的分离胶DDD (2013-5-30 16:13:21)
如果你想跑10k的蛋白,你可以试试看15%的胶怎么样
invitrogen的4-12%的bis-tris预制胶用MES buffer跑,可以很清楚的分离10k以下的蛋白,你也可以试试看用他们的配方来自己配胶和电泳buffer
summerxx (2013-5-30 16:16:47)
最近我们跑胶也遇到过一次同样的问题,那次跑胶的时间比较平时长,分离胶10%,后来把电泳时间缩短了,换了12%的胶,结果正常了,很奇快的现象,至今没想明白。
小游abc (2013-5-30 16:18:23)
invitrogen的4-12%的bis-tris预制胶用MES buffer跑,可以很清楚的分离10k以下的蛋白,你也可以试试看用他们的配方来自己配胶和电泳buffer
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我是想跑20kD左右,用了15%的胶,那条线还在,但是跑到10kD marker下面去了,不知道这样影响实验结果吗?我想转膜!谢谢!
小游abc (2013-5-30 16:19:39)
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那缩短什么时间啊?谢谢!
fsdd817 (2013-5-30 16:26:00)
小游abc (2013-5-30 16:27:08)
小游abc (2013-5-30 16:28:11)
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PH8.8的Tris-HCl我重新配置的。
ROSE李 (2013-5-30 16:28:57)
我也遇到过最后14KD的带很细,但是最近我把4*分离胶和浓缩胶缓冲液换了新的后又好了
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