如何利用流式细胞仪检测细胞周期

2018年7月13日 13:27:12 来源: 互联网
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首先我们这边先来看下这样的问题:新消化获得的细胞直接染色立马上机检测,这一步是不是必须的?RnaseA的作用包不包括去处胞内的双链RNA?是的话,RnaseA能直接穿膜吗?不是的话,胞内的双链RNA不管了?阴参的设定是不是健康成人外周血的淋巴细胞就可以了?
       根据这样的染色方法而定,原理都是先打孔再染色,因为PI没有穿膜作用。
所以不同就在打孔的方法上。现在基本有两种方法,一种就是乙醇固定。70-75%浓度效果都差不多,优点是作用比较轻柔,可长时间固定,一般一个月都没问题,更长时间我没试过。适用于不能预计上机时间的朋友,可以先固定好几批细胞然后再一起染色上机。缺点就是打孔时间较长,至少过夜才能保证打孔效果。

       另一种就是用Triton打孔,这种方法比较激烈。优点是速度快,消化以后可以马上打孔染色上机,而且不使膜蛋白变性,不容易造成粘连。缺点就是不能长时间保存样品,一般好半个小时内检测,不然时间越久细胞DNA含量的离散度越高,图像越难看。不过现在很多厂家的试剂盒都是用这种快速打孔的方式。

       膜通透性改变以后酶可以进去。


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