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细胞同步化实验_离心洗脱法

2019.4.02
实验材料

细胞

仪器、耗材

洗脱离心机培养基锥形瓶洗脱仪

实验步骤

1. 准备下列仪器:

洗脱离心机

装有一个大容器中的 20 L 培养基,含 0.5%~1% 血清和抗生素,置于室温

20 个 1 L 的锥形瓶,用以收集各洗脱组分

2. 至少提前 10 天开始培养细胞,进行离心洗脱时细胞连续进入指数生长期且不会达到太大的饱和度。

3. 按洗脱仪提供的说明,安装转头和离心机,加入去离心水启动整个系统。

4. 细胞装在 1 L 的瓶子中,600 g,离心 25 分钟。

5. 倒尽上清,合并所有的细胞沉淀至一支 50 ml 规格的管中,终体积 40~50 ml。

6. 将上述浓缩的细胞悬液通过一支装有 18# 针头的注射器,打散细胞团块。

7. 显微镜检查细胞,如果有必要,用更小的针头重复处理直至大于 95% 的是单细胞。

8. 往洗脱系统中泵入含 0.5%~1% FCS 的培养基。

9. 参考洗脱仪附带的说明进行适当的细胞注入操作。

10. 首先分离个体小的 G1 期细胞,慢慢提高流速。

11. 当细胞室内看起来似乎没有什么细胞时,停止转头,维持流速,洗脱出残余的细胞。

12. 一边洗脱,一边用 Channelyzer 计数细胞和测量细胞大小。洗脱完毕,有必要分析各组细胞所位于的细胞周期的哪一阶段。

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