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叶绿素的理化性质测定实验

2019.4.11
实验方法原理叶绿素是一种二羧酸的酯,可与碱起皂化作用,产生的盐能溶于水,可用此法将叶绿素与类胡萝卜素分开。叶绿素与类胡萝卜素都具有共轭双键,在可见光区表现出一定的吸收光谱,可用分光镜检查或用分光光度计精确测定。叶绿素吸收光量子后转变成的激发态叶绿素分子很不稳定,当它回到基态时,可以发出红光量子,因而产生荧光。叶绿素的化学性质也很不稳定,容易受强光的破坏,特别是当叶绿素与蛋白质分离后,破坏更快。叶绿素分子中的镁可被H+所取代而成为褐色的去镁叶绿素,后者遇到Cu2+可形成绿色的铜代叶绿素,这种叶绿素在光下不易受到破坏,故常用此法制作绿色多汁植物的浸制标本。
实验材料

菠菜叶木瓜叶

试剂、试剂盒

95﹪酒精KOH甲醇溶液醋酸醋酸铜粉碳酸钙石英砂

仪器、耗材

天平分光镜小电炉试管量筒移液管研钵小烧杯漏斗等

实验步骤

1. 叶绿体色素提取

称取新鲜叶片2g剪碎于研钵中,加少量95﹪酒精(或80﹪丙酮)和少量CaCO3粉及石英砂,研磨成匀浆,再加95﹪酒精(或80﹪丙酮)l0ml稀释研磨后,用滤纸过滤于小瓶中,滤液即为叶绿体色素提取液。

2. 叶绿素的皂化作用(绿色素与黄色素的分离)

(1) 用移液管吸取叶绿体色素提取液约5ml放入试管中,再加入1.5ml左右20﹪KOH甲醇溶液,充分摇匀。

(2) 片刻后,加入5ml苯,摇匀,再沿试管壁慢慢加入1~1.5ml蒸馏水,轻轻混匀(勿激烈摇荡),静置试管架上,可看到溶液逐渐分为两层,下层是稀的乙醇溶液,其中溶有皂化叶绿素a和b(以及少量叶黄素),上层是苯


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