丝裂霉素C处理制作饲养层
实验概要
丝裂霉素C处理制作饲养层
主要试剂
细胞基础培养液、0.05%Trypsin、DPBS、0.1%明胶、1 mg/mL丝裂霉素C
实验材料
100 mm培养皿、15 mL离心管、离心机
实验步骤
（1）第三代的细胞长满达到90%的时候，弃掉培养液。
（2）100 mm培养皿中加入4 mL新的细胞基础培养液，再加入40μL丝裂霉素C溶液。
（3）在培养箱内孵育2 h后，吸弃培养液，并用DPBS冲洗洗3～4遍。
（4）0.05% Trypsin消化2～3 min，等量细胞基础培养液终止消化，将细胞转移到15 mL离心管中，1000 r/min离心3 min；
（5）用细胞基础培养液重悬细胞后直接接种于0.1%明胶包被的100 mm培养皿中，或冻存以备后续使用。细胞接种时应进行细胞计数，细胞接种密度大致为2×105细胞/cm2，重悬后接种到0.1%明胶包被的培养皿中。
！注意： 0.1%明胶包被培养皿时，一般在培养皿中加入刚好盖住皿底的明胶，室温或者培养箱孵育30 min左右，弃0.1%明胶后用DPBS洗培养皿，待用。
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