新型隐球菌性脑膜脑炎诊断方法
新型隐球菌性脑膜炎/脑炎是由新型隐球菌侵入所引起的感染性疾病，是中枢神经系统真菌感染中最常见的一种。新型隐球菌有三个变种，即新生变种、格特变种和上海变种。人体的肺、皮肤等部位感染新型隐球菌后，可以向中枢神经系统播散，但多数新型隐球菌性脑膜炎/脑炎患者并不伴有外周的新型隐球菌感染。新型隐球菌是机会致病菌，在免疫功能低下（如长时间使用广谱抗菌素、糖皮质激素、免疫抑制剂等药物和艾滋病等）患者，新型隐球菌性脑膜炎/脑炎的发病率显著升高。起病隐袭、病程进展快、临床表现和影像学均无特异性是新型隐球菌性脑膜炎/脑炎的特点，因此，脑脊液的病原学检查就显得尤为重要。
目前，新型隐球菌的实验室检查方法很多，但主要的有以下几种。
1.新型隐球菌培养为诊断的金标准，并可鉴定新型隐球菌的类型，但培养所需时间较长。
2.墨汁染色（负染色法）其是根据背景着色而菌体本身不着色的原理来衬染荚膜，方法简单快速，为诊断的金标准，但检出率会随着荚膜的破裂而下降。此外，新型隐球菌数量较少和检验人员的识别经验不足（如将隐球菌判断为气泡和白细胞，或将气泡和白细胞等误认为隐球菌），也会影响墨汁染色的结果，造成假阴性或假阳性。
3.脑脊液细胞学检查方法快速简便，为诊断的金标准，不仅可以通过细胞分类来评估患者的免疫状态和治疗效果，而且未治疗患者的脑脊液经细胞玻片离心沉淀仪制片和瑞氏-吉姆萨（MGG）染色后，极易查见新型隐球菌。光镜下，MGG染色的新型隐球菌菌体深蓝、圆形（直径5~15μm）、常成簇排列、无核、荚膜可呈辐射状，部分菌体可见出芽。
经MGG染色的新型隐球菌着色不受荚膜破裂的影响，且形态特殊，易于辨认，不易漏诊。而将脑脊液中的有形物采用离心沉淀法收集，也极大地提高了新型隐球菌的阳性检出率。樊新红等发现，脑脊液细胞学检查首次腰穿新型隐球菌检出率为95.8％，显著高于墨汁染色的68.8%。
4.阿利新兰染色方法简便快速，为诊断的金标准。但因同为衬染荚膜的染色， 荚膜破裂会造成阳性检出率的下降。
5. 新型隐球菌菌体计数（血球计数板）法 快速简便，为诊断的金标准。但有时菌体难与白细胞区分，辨认较困难。
6. 新型隐球菌荚膜多糖体抗原检测 快速简便，敏感性和特异性高，但不能作为诊断的金标准。目前多采用乳胶凝集试验和胶体金法。
7. PCR技术 相对于上述几种检测方法，PCR技术成本昂贵，操作复杂，并无优势可言。
8. 基因组学方法 敏感性高，特异性强。脑脊液培养、墨汁染色、MGG染色、阿利新兰染色和新型隐球菌菌体计数虽为诊断的金标准，但当病原体数量极少时，皆可呈阴性，且除脑脊液培养外，其余方法均不能鉴别新型隐球菌的类型。新型隐球菌类型的鉴定对于临床治疗具有指导意义。使用二代测序技术（Next Generation Sequencing，NGS)检测脑脊液中的新型隐球菌，不仅可以检测出极微量的病原体，提高检出率，而且还可以进行相关分型，对于新型隐球菌脑膜炎/脑炎早期诊断和治疗都具有十分重要的临床意义。
