BCA蛋白浓度测定试剂盒使用说明
BCA蛋白浓度测定试剂盒
产品简介: BCA 蛋白定量法是一种快速灵敏、稳定可靠的蛋白定量测定方法，其测定
范围是10－2000ug/ml，是比Lowry 法更优越的专用于检测总蛋白质含量的产品。BCA
法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响。其在562nm 处有最大的吸收
值，通过与标准曲线对比，即可计算待测蛋白的浓度。
原理: BCA(bicinchonininc acid)与二价铜离子的硫酸铜等其他试剂组成的试剂，混合一
起显示为苹果绿色，即BCA 工作试剂。在碱性条件下，BCA 与蛋白质结合时，蛋白质
将Cu2+还原为Cu+，一个Cu+螯合二个BCA 分子，工作试剂由原来的苹果绿形成紫色复
合物，最大光吸收强度与蛋白质浓度成正比。
试剂盒组成：
BCA01(50ml) BCA02(100 ml)
试剂A: BCA 碱性溶液50ml 100ml
试剂B:硫酸铜溶液1ml 2 ml
试剂C:标准BSA 蛋白（1mg/ml） 1ml 1 ml× 2
1.5ml离心管25个50 个
说明书一份
试剂盒保存：试剂A 和B 在室温的稳定期至少1 年以上。标准蛋白液保存在－20℃,
短期则4℃保存.
测定方法1：（试管法）
1、配制工作液: 根据标准品和样品数量，按50 体积试剂A，1 体积试剂B 配制适
量BCA 工作液，充分混匀。注意：BCA 工作液室温24 小时内稳定。工作液配制的量要与
测定所用的比色杯对应。每个测定要做2-3 个平行反应。本处列举的比色体系所用的是
0.5ml 的比色杯；如果没有0.5ml 比色杯，反应体系需要放大到实验将采用的比色杯准
确读数所需要的体积。
2、BSA 标准品和样品的准备：样品用水或其它不干扰显色反应的缓冲配置，使待
测定的浓度位于标准曲线的线性部分。每个反应准备3 个平行测定。标准曲线一般5-6
个点即可，根据样品的估测浓度确定各点的具体浓度。稀释BSA 时,可以用水或与样品
一致溶液。如待测定的浓度为200μg/ml 左右，按下表的次序加入BSA 标准品、样品及
BCA 工作液。
3、取适当体积的标准蛋白（蛋白样品）以蛋白液：工作液为1：20 的比例混匀，
37℃温浴30min，冷却至室温。
4、将样品与标准品在562nm 波长下测定吸光度。
1、绘制标准曲线，通过标准曲线计算样品的浓度。注意: 实际浓度需要乘以样品的稀
释倍数。
1 2 3 4 5 6 7 待测样品
稀释1
待测样品
稀释2
BSA (μl) 0 2.5 5 10 15 20 25
H2O (μl) 25 22.5 20 15 10 5 0 0 0
工作液(μl) 500 500 500 500 500 500 500 500 500
OD562
OD562 平均值
测定方法2：（96孔板）
1、配制BCA 工作液: 根据标准品和样品数量，按50 体积试剂A，1 体积试剂B 配
制适量BCA 工作液，充分混匀。
2、将蛋白标准品按0, 1, 2, 4, 6，8, 10 微升加到96 孔板的蛋白标准品孔中，加灭
菌双蒸水补足到10 微升；取10 微升待测样品加入96 孔板。每个测定要做2-3 个平行.
3、向带测样品孔和蛋白标准品孔中加入200 微升BCA
工作液（即样品与工作液的体积比为1：20）混匀。
4、37℃温浴30min。冷取至室温。
5、酶标仪562nm 波长下测定吸光度。
6、制作标准曲线，从标准曲线中求出样品
浓度。
注意事项：
1、反应颜色的深浅除了与样品的蛋白质浓度相关外，还与反应的温度有关。如果样品
的浓度较高（>50μg/ml），反应温度一般采用37 度。如果样品蛋白质的浓度较低
（<50μg），反应的温度为60℃，该温度下，色氨酸、酪氨酸和肽键得到充分氧化，大
大提高检测灵敏度。
2、该方法检测的蛋白质浓度范围20μg-500μg/ml；当蛋白浓度＜20ug/ml 时，推荐60℃
温浴，并将蛋白液：工作液的比例调至1：8 进行测定（增强法）可以检测到5ug/ml。
试剂A 和B 在室温的稳定期至少1 年以上。标准蛋白液保存在－20℃,短期则4℃保存.
