（四）各种酶类实验

氧化酶试验

（1）原理：

氧化酶(即细胞色素氧化酶)，是细胞色素氧化酶系统中的最终呼吸酶。具有氧化酶的细菌，首先使细胞色素C氧化，再由氧化型细胞色素C再使对苯二胺氧化，生成有色的醌类化合物。因此，本试验结果与细胞色素C的存在有关。

（2）实验方法：

菌落法：直接滴加试剂于被检菌落上；滤纸法：取洁净滤纸一小块，蘸取菌少许，然后加试剂；试剂纸片法：将滤纸片浸泡于试剂中制成试剂纸片，取菌涂于试剂纸上。

（3）结果：

细菌在与试剂接触10秒内呈深紫色，为阳性。无色为阴性。为保证结果的准确性，分别以铜绿假单胞菌和大肠埃希菌作为阳性和阴性对照。

（4）应用：

主要用于肠杆菌科细菌和假单胞菌属的鉴别，前者阴性，而后者阳性。奈瑟菌属、莫拉菌属细菌也呈阳性反应。

过氧化氢酶试验(触酶试验)

（1）原理：

具有过氧化氢酶的细菌，能催化过氧化氢成为水和原子态氧，继而形成氧分子，出现气泡。

（2）实验方法：

取洁净玻片1张，用接种环挑取细菌，加3%过氧化氢数滴，立即观察结果。

（3）结果：

若立即出现大量气泡为阳性。无气泡为阴性。

（4）应用：

革兰阳性球菌中，葡萄球菌和微球菌均产生过氧化氢酶，但链球菌科阴性，故该试验常用于革兰阳性球菌的初步分群。

硝酸盐还原实验

（1）原理：

硝酸盐还原反应包括两个过程：一是在合成代谢过程中，硝酸盐还原为亚硝酸盐和氨，再由氨转化为氨基酸和细胞内其它含氮化合物；二是在分解代谢过程中，硝酸盐或亚硝酸盐代替氧作为呼吸酶系统中的终末受氢体。硝酸盐还原过程可因细菌不同而异。有的细菌仅使硝酸盐还原为亚硝酸盐，如大肠埃希菌等；有的细菌可使其还原为亚硝酸盐和离子态的铵；有的细菌能使硝酸盐或亚硝酸盐还原为氮，如假单胞菌；有的细菌还可以将其还原产物在合成性代谢中完全利用。

（2）实验方法：

将待检菌接种于硝酸盐培养基(内含小倒管)中，35℃孵育1~4d。将甲、乙等量混合液(用时混合)(约0.1ml)加于试管内，立即观察结果。

（3）结果：

出现红色为阳性反应。若加入试剂后无颜色反应，可能是：

①硝酸盐没有被还原，试验阴性；

②硝酸盐被还原为氨和氮等其他物质而导致假阴性结果，这时应在试管内加入少许锌粉，如出现红色则表明试验确实为阴性。若仍不产生红色，表明试验为假阴性。

若要观察是否有氮气产生，可于培养基管内加1只小导管，有气泡产生，则表示有氮气生成。

（4）应用：

本试验广泛用于细菌鉴定。肠杆菌科细菌均能还原硝酸盐为亚硝酸盐;铜绿假单胞菌、嗜麦芽窄食单胞菌等假单胞菌属均可产生氮气；有些厌氧菌如韦荣菌等试验也为阳性。

淀粉酶实验

（1）原理：

有些细菌具有合成淀粉酶的能力，可以分泌胞外淀粉酶，淀粉酶可以使淀粉水解为麦芽糖和葡萄糖，淀粉水解后遇碘不在变蓝。

（2）培养基：

淀粉琼脂培养基。

（3）实验方法：

在淀粉培养基上接种实验菌株后，30℃培养1～2周后将平板取出，滴加少量卢戈氏碘液于平板上。观察菌苔周围的培养基有无色透明圈出现。