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高效液相色谱测定保健品西地那非的解决方案

2019.9.17

方案优势    

简单、快速、准确。            

采用标准     

国家相关标准         

方法/原理/步骤     

标准溶液配制

精确称取100 mg枸橼酸西地那非标准品于100 mL容量瓶中,加入流动相50 mL使溶解,再用流动相定容至刻度,配制成1 mg/mL的储备液。取储备液适量,用流动相逐级稀释,配制成浓度分别为0.5、5.0、10.0、20.0、40.0、80.0µg/mL的标准溶液。

样品处理

固体样品:称取样品10 g,研磨均匀,然后精密称取2 g研磨均匀的样品,加入1%甲酸甲醇溶液10 mL,超声提取30 min后用1%甲酸甲醇溶液补足体积,过滤,取5 mL滤液作为待净化液。 液体样品:按样品体积比1%加入甲酸,过滤,精密取滤液5 mL作为待净化液。

Strata X-C小柱依次用3 mL甲醇和3 mL水活化平衡后,将待净化液分次过该小柱,再分别用3 mL水和3 mL甲醇清洗,抽至近干后,用5%氨水甲醇溶液洗脱3次,每次1 mL,收集洗脱液。整个过程流速小于1 mL/min。洗脱液用氮气吹干,1 mL流动相溶解,0.45µm滤膜滤过,续滤液作为供试品溶液。

固相萃取条件的选择

保健品中成分复杂,简单的液-液萃取并不能除去大部分杂质,会严重干扰西地那非的液相测定。Strata-X-C是混合型阳离子交换固相萃取小柱,对碱性化合物有很强的专属选择性,成功用于复杂样品中三聚氰胺等碱性化合物的纯化和浓缩。

西地那非为碱性化合物,本法利用其碱性性质,采用Strata-X-C对样品进行纯化和浓缩,分别使用水和甲醇清洗,除去大部分水溶性和脂溶性杂质,再用5%氨水甲醇溶液洗脱碱性的西地那非。

本固相萃取方法净化效果好,回收率稳定,平均为95.8%(20µg/mL,RSD=3.9%,n=6)。

色谱条件的选择

本法试验了不同比例的乙腈与0.1%甲酸水溶液以及乙腈与不同浓度醋酸铵水溶液作流动相的效果,发现乙腈与10 mM醋酸铵水溶液作流动相时,峰形对称、尖锐,检测灵敏度高。本法还采用实验室常用的紫外检测器检测,适用于一般实验室的常规检测分析。

本法使用了50 mm长的Kinetex C18色谱柱。Kinetex C18色谱柱是一种新型核-壳技术填料色谱柱,由于大大改善了填料的传质阻抗影响,可以在常规液相色谱仪器上实现超高压液相的性能,从而达到快速、高效的效果,大大提高工作效率,且不受仪器条件的影响,方便在各个实验室进行方法转移。在流速1.8 mL/min下,西地那非在约2.5 min处出峰,没干扰。         

仪器设备     

主要仪器

高效液相色谱仪(南京科捷);超声波清洗器;氮吹仪;离心机。

试剂

枸橼酸西地那非标准品;固相萃取小柱Strata X-C 60 mg/3 mL;乙腈;甲酸、氨水、醋酸铵;文中所用水均为超纯水。

色谱条件

色谱柱:C18 2.6µm 50 mm x 4.6 mm;

流动相:乙腈-10 mM醋酸铵(V/V=35/65);

流速:1.8 mL/min;

柱温:室温;

检测波长:290 nm;

进样量:10µL                 

结论     

本法采用阳离子交换固相萃取小柱对样品进行净化后,进行高效液相色谱分析。固相萃取可除去样品中的大量杂质,再使用高效的液相色谱柱使枸橼酸西地那非能够快速出峰(仅约2.5 min)而不会受杂质峰干扰。

该方法操作简单,省时快速,精密度和准确度高,可用于片剂、胶囊剂、丸剂等固体保健品和口服液、酒类等液体保健品中枸橼酸西地那非的检测。


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