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实验误差原因到底出在何处?不妨看看比色皿(二)

2020.3.22

比色皿的使用    

在使用比色皿时,两个透光面要完全平行,并垂直置于比色皿架中,以保证在测量时,入射光垂直于透光面,避免光的反射损失,保证光程固定。

比色皿一般为长方体,其底及两侧为磨毛玻璃,另两面为光学玻璃制成的透光面采用熔融一体、玻璃粉高温烧结和胶粘合而成。所以使用时应注意以下几点:

(1) 拿取比色皿时,只能用手指接触两侧的毛玻璃,避免接触光学面,用力不可过大。同时注意轻拿轻放,防止破损。

(2) 比色皿中不应长期盛放含有腐蚀玻璃物质的溶液。

(3) 比色皿高温后易爆裂,因此不应放在火焰或电炉上加热或干燥箱内烘烤。

(4) 当比色皿里面被污染,应用无水乙醇清洗,并晾干或及时擦拭干净。

(5) 比色皿的透光面不应与硬物或脏物接触。比色皿使用时请勿碰撞。

(6)盛装溶液时,高度应为比色皿的2/3 处,光学面如有残液可先用滤纸轻轻吸附,然后再用镜头纸或丝绸顺着同一方向擦拭。

(7)比色皿中的液体,应沿毛面倾斜,慢慢倒掉,不要将比色皿翻转,直接口向下放在干净的滤纸上吸干剩余液,然后用蒸馏水冲洗比色皿内部倒掉(操作同上)避免液体外流,使第2次测量时不用擦拭比色皿,不致因擦拭带来的误差。

(8)比色前将各个比色皿中装入蒸馏水,在比色波长下进行比较,误差在±0.001吸光度以内的比色皿选出4-8个进行比色测定,可避免因比色皿差异造成测量误差

(9)比色皿在使用后,应立即用水冲洗干净。必要时可用1:1的盐酸浸泡,然后用水冲洗干净。

(10)在测量时如对比色皿有怀疑,可自行检测。可将波长选择在实际使用的波长上,将一套比色皿都注入蒸馏水,将其中一只的透射比调至95%(数显仪器调置100%)处,测量其它各只的透射比,凡透射比之差不大于0.5%即可配套使用。

前人用过的经验    

1 使用前将比色皿在2%的硝酸溶液中浸泡24小时,然后用水,蒸馏水依次冲洗干净,擦干。

2 比色前将各个比色皿中装入蒸馏水,在比色波长下进行比较,误差在±0.001吸光度以内的比色皿选出4-8个进行比色测定,可避免因比色皿差异造成测量误差。

3 比色皿中的液体,应沿毛面倾斜,慢慢倒掉,不要将比色皿翻转,直接口向下放在干净的滤纸上吸干剩余液,然后用蒸馏水冲洗比色皿内部倒掉(操作同上)避免液体外流,使第2次测量时不用擦拭比色皿,不致因擦拭带来的误差。

比色皿管理维护    

(1) 按照实验中所使用的波长来选择相应的比色皿( 玻璃或者石英) ,紫外光区用石英比色皿,而可见光区既可以使用玻璃比色皿,又可以使用石英比色皿。考虑到价格问题,可见光区选用玻璃比色皿。尽量做到专人专用或者专组专用,用完清理后就交回。这样不易搞混不同的比色皿,也不影响比色皿间的配对。

(2) 尽量做到每个实验每台紫外分光光度计有专用的配套比色皿,不相互混用。如有交叉使用,可记录在册,下次恢复正常。

(3) 用完即清洗,清洗后在通风阴凉处干燥,等彻底干燥后放入相应装具中。放置时,装具保持清洁干燥,比色皿应秉承“光面朝上,毛面在两侧”的原则,这样便于抓取两毛面拿出使用,不易弄污光面。

关于比色皿配对与误差测定的说明     

比色皿配对比较麻烦,一般在分光光度法测定时采用比色皿误差测定后进行样品的测定。

1、比色皿配对

样品溶液先配成吸收度在0.6-0.8之间的浓度测定,然后用同批溶剂将溶液稀释一倍,再测吸收度。

从供试品溶液的配制起,平行操作两次,并注明测定时的温度。

同一台仪器测定所得二份结果间的偏差应不超过l%。当结果符合要求后,对各台仪器测得的平均值进行统计,若相对标准偏差不超过1.5%,则以测得的平均值为相应药物的吸收系数。

现行的国家检定规程中规定配对的两只比色皿间差值不得超过±0.5%。因为在可见光区,玻璃比色皿和石英比色皿都可以使用,所以可利用每对比色皿间的透光率直接进行比较。

使用4对比色皿,在波长500nm下,以空气和纯水为介质,使用透光率T 进行测量,将每组比色皿中的一只透射率调为100%,测量另外一只透光率,凡透射率之差不大于5% ( △T=0.005=0.5%) ,即可配对使用。

2、比色皿误差测定与样品测定

1)任意取用2只清洁比色皿。

2)2只比色皿中加入相同的空白溶液。

3)以其中的任何一只比色皿为空白皿,调节仪器的吸收度为0;

4)测定另一只比色皿的吸收度,测得值为A0。用此比色皿测定样品,仪器的显示值为A,则样品的真实测得值A样=A-A0

谈到实验中的紫外分光光度法,大家更多关注的是紫外分光光度计的仪器性能等等,而往往忽略了比色皿,但是您知道吗,小小的比色皿其实也有很多讲究,而且对实验结果的影响也很明显。


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