武汉赛默飞生命科技有限公司成立于2019年，注册资金100万元，公司办公场所坐落武汉光谷生物城。赛默飞生命致力于为行业内的客户提供技术开发、技术咨询、技术转让等服务，秉承着“我们用心 客户省心”的服务理念打造出一支敢于创新、敢于挑战的综合服务团队。

　　赛默飞生命主营业务：HEp-2-NS1细胞人喉表皮样癌细胞、细胞库、试剂、/抗原、、多肽、耗材/消耗品、实验仪器/设备、器械等。

　　赛默飞生命以技术为主导，产品的质量为核心，服务体系为保障，发挥人才优势，长期致力于打造成国内先进的科研企业与机构。

　　赛默飞生命持续通过开放的合作态度、专业的服务机制、持续的**理念全力打造企业的核心竞争力为成为上等的行业服务供应商锐意进取。

　　HEp-2-NS1细胞人喉表皮样癌细胞。复苏操作流程

　　1. 准备工作，开水浴锅，预热试剂，超净工作台紫外照射 30min,找到对应细胞在液氮罐中的位置

　　2. 紫外照射后风机吹 10min 后，酒精擦拭台面，放入试剂和离心管，取 15ml 离心管，加入 9ml 培养液

　　3. 在液氮罐中取出细胞，先拧松放液氮，再拧紧，将冻存管放入 PE 手套中，然后水浴融化后取出，1-2min

　　4. 将冻存管喷酒精后放入超净台内，擦干管壁，用 1ml 头将细胞转移到已加培养液的离心管中

　　5. 800-1000rpm 离心 5min,注意配平

　　6. 将离心好的细胞弃上清，加入 5ml 完全培养基重悬，用移液管吹打 8-10 次， 避免产生气泡，将细胞悬液接种到 10cm 培养皿中，补加 5ml 培养液

　　7. 混匀，十字法或者 8 字法

　　8. 将混好的细胞放入培养箱中培养

　　HEp-2-NS1细胞人喉表皮样癌细胞。注意事项

　　1. 上述操作方案的数据可作为参考，实际操作已实验室配备的耗材为准，

　　2. 冻存时含 10%DMSO,事先加 9ml 培养液是为了稀释 DMSO，理论上 1%DMSO

　　对细胞性

　　3. 隔着 PE 手套能有效防止水浴过程中导致污染

　　4. 重悬的体积只是作为参考，具体的根据需要可进行调整

　　5. 由于复苏过程中已经离心，第二天可根据实际情况选择换液或者不换液（主要针对贴壁细胞）

　　HEp-2-NS1细胞人喉表皮样癌细胞。培养操作

　　1）复苏细胞：将含有 1mLHEp-2-NS1细胞人喉表皮样癌细胞。悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜（或将 细胞悬液加入 10cm 皿中，加入约 8ml 培养基，培养过夜）。第二天换液并 检查细胞密度。

　　2）细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。

　　HEp-2-NS1细胞人喉表皮样癌细胞。培养注意事项

　　1. 收到HEp-2-NS1细胞人喉表皮样癌细胞。后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现 象发生请及 时和我们联系。

　　2. 仔细阅读HEp-2-NS1细胞人喉表皮样癌细胞。说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致。若由于培养条件不一致而导致细胞出现问 题，责任由客户自行承担。

　　3. 用 75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题贴壁细胞会有少量 从瓶壁脱落，将细胞置于培养箱内静置培养 4~6 小时,再取出观察。此时多数细胞均会贴壁，若细胞仍不能贴壁请用台盼蓝 染色测定细胞活力，如果证实细胞活力正常， 请将细胞离心后用新鲜培养基再次贴壁培养；如果染色结果显示细胞无活 力，请拍下 照片及时和我们联系，信息确认后我们为您再免费寄送一次。

　　4.静置细胞贴壁后，请将细胞瓶内的培养基倒出，留 6~8mL 维持细胞正常培养，待细 胞汇 合度80%左右时正常传代。

　　5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。培养瓶内多余的培养基可收集备用，细胞传代时可以 一定比例和客户自备的培养基混合，使细胞逐渐适应培养条件。

　　6.建议客户收到HEp-2-NS1细胞人喉表皮样癌细胞。后前 3 天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和 赛默飞技术 部 沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和我们联 系，告知细胞的具体情况，以便我们 的技术人员跟踪回访直至问题解决。

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