关于DNA测序的准备工作的介绍

　　准备工作

　　1. BigDye测序反应试剂盒 主要试剂是BigDye Mix，内含PEZL四色荧光标记的ddNTP和普通dNTP，AmpliTaq DNA polymerase FS，反应缓冲液等。

　　2. pGEM-3Zf (+) 双链DNA对照模板 0.2 g/L，试剂盒配套试剂。

　　3. M13(-21)引物 TGTAAAACGACGGCCAGT，3.2 μmol/L，即3.2 pmol/μl，试剂盒配套试剂。

　　4. DNA测序模板 可以是PCR产物、单链DNA和质粒DNA等。模板浓度应调整在PCR反应时取量1 μl为宜。本实验测定的质粒DNA，浓度为0.2 g/L，即200 ng/μl。

　　5. 引物需根据所要测定的DNA片段设计正向或反向引物，配制成3.2 μmol/L，即3.2 pmol/μl。如重组质粒中含通用引物序列也可用通用引物，如M13(-21)引物，T7引物等。

　　6. 灭菌去离子水或三蒸水。

　　7. 0.2 ml或和0.5 ml的PCR管 盖体分离。

　　8. 3 mol/L 醋酸钠(pH5.2) 称取40.8 g NaAc·3H2O溶于70 ml蒸馏水中，冰醋酸调pH至5.2，定容至100 ml，高压灭菌后分装。

　　9. 70%乙醇和无水乙醇。

　　10. NaAc/乙醇混合液 取37.5 ml无水乙醇和2.5 ml 3 mol/L NaAc混匀，室温可保存1年。

　　11. POP 6测序胶 。

　　12. 模板抑制试剂(TSR) 。

　　13. 10×电泳缓冲液 。

　　14. 全自动DNA测序仪。

　　15. PCR仪。

　　16. 台式冷冻高速离心机。

　　17. 台式高速离心机或袖珍离心机。