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免疫沉淀实验——抗Ig血清免疫沉淀放射性标记抗原

2019.3.28
实验材料

蛋白质

试剂、试剂盒

SDS

仪器、耗材

离心机摇床

实验步骤

1.  按基本方案进行,但以下说明的操作步骤已经修改:

 

(2a)按每毫升加入2 μl 正常血清的量对放射性标记抗原进行预澄清处理,加入适量的抗血清,于4℃放置12~18 h, 111 000 g 离心10 min,保留上清。

 

(4a)加入1 μl 抗原特异性抗血清,3 μg 抗原持异性纯化单抗,或抗原特异性杂交瘤培养上清(克隆细胞系来源的加30 μl 或未克隆细胞系来源的加100 μl),用漩涡混合器混匀,于4℃放置2 h。然后加入合适量的抗血清,旋涡混合器混匀后,于4℃放置12~18 h。

 

(5a)按基本方案洗涤免疫沉淀物,但以1 000 g 离心7 min。

 

(6a)加入20~50 μl SDS样品缓冲液,不要旋起,否则免疫沉淀物会粘在液面上的管壁。 盖紧盖子,对免疫沉淀物、先在56℃保温1 h,然后在100℃保温5 min。将混合物加样于凝胶,如基本方案步骤7进行分析。

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